栀子拮抗内毒素活性物质京尼平苷的分离制备及其活性评价
构成革兰阴性菌(Gram-negative，G-)外膜的主要成分内毒素(lipopolysaccharide，LPS)，是介导细菌脓毒症的重要病原分子，LPS由O-侧链多糖、核心多糖和脂质A(LipidA)三部分组成，其中LipidA是LPS的生物学活性中心。研究证实，LPS在脓毒症发生过程中具有重要作用，因此，寻求能拮抗LPS的药物是预防和治疗G-细菌介导的脓毒症的重要手段；传统中草药在脓毒症领域的应用具有悠久的历史。现代医学实践已证明，许多中药在体内外都具有拮抗内毒素的作用。然而由于中药成份复杂，在分离纯化的过程中缺少有效的活性跟踪手段，使对具有拮抗内毒素活性中药的深入研究受到限制。本课题利用本实验室建立的生物传感器筛选和跟踪平台，对与LipidA具有较高结合活性的栀子进行拮抗内毒素活性组分的定向分离，以期获得具有拮抗内毒素活性的单体化合物，为脓毒症的防治研究提供一种可能的手段。
方法：(1)依托课题组前期已经建立的生物传感器筛选平台，选择60种药物与LipidA进行结合活性的检测，选择具有高结合活性的药物进行研究(2)应用与LipidA的结合活性测定及对脓毒症模型动物的保护作用作为分离过程中的活性跟踪手段，采用大孔吸附树脂、萃取、聚酰胺层析、HPLC等技术对栀子进行活性组分的定向分离，以期最终得到具有拮抗LPS活性的单体化合物(3)对所得化合物进行HPLC、薄层色谱及熔点测定等技术分析。(4)活性评价：在体外应用鲎试验观察化合物对LPS的中和作用，并通过细胞培养观察化合物对LPS介导的RAW264.7活化的抑制作用；在体内观察其在小鼠体内对LPS的中和作用。
结果：(1)对60种清热解毒中草药进行结合活性测定，筛选出22种与LipidA具有较高结合活性的中药，并以其中的栀子作为研究对象(2)从栀子水提取物中定向分离出一个与LipidA具有较高结合活性的化合物cJ-1(3)经HPLC、薄层色谱及熔点测定等技术分析，初步确定CJ-1为京尼平苷(C17H24O10)(4)活性评价：京尼平苷在体外对LPS具有较好的中和作用，并呈现剂量效应关系；能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α；在小鼠体内对LPS也具有显著的中和作用。
结论：利用大孔吸附树脂层析、聚酰胺层析、HPLC等技术从栀子中分离出化合物京尼平苷，京尼平苷在体内外对LPS均具有较好的拮抗作用。
革兰阴性菌;内毒素;活性物质;京尼平苷;分离制备;栀子拮抗内毒素
第三军医大学
硕士
临床检验诊断学
郑江
2008
中文
R284.2
60
2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）