广西猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3基因克隆及分子流行病学调查研究
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病自发现以来给世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。2006年夏秋之季，我国部分地区发生猪“高热病”疫情，对养猪业造成巨大损失，发现了高致病性猪繁殖与呼吸综合征变异病毒，证实疫情主要是由该病毒引起的。
本研究通过RT-PCR技术对2006月年至2008年2月送检的56份病料进行PRRSV检测，结果30份为阳性，阳性率达54％。本实验对这30份阳性病料作为研究对象，根据北美洲株ATCC-VR2332和中国标准株CH-1a的序列利用Primer设计—对针对ORF3基因的特异性引物GP3-1/GP3-2，通过RT—PCR扩增出约900bp的基因片段，与预期的目的片段大小相符。将其插入克隆载体质粒pMD18-T。构建重组质粒，对克隆的ORF3基因进行序列测定，测序结果显示ORF3基因全长765bp。包含完整的ORF3基因的开放阅读框架，编码254个氨基酸。将ORF3基因序列与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、VR2332、RespPRRS MLV和CH-1a的ORF3基因进行同源性比较，结果显示，30份毒株的ORF3基因序列之间的核苷酸同源性为90.8％～99.9％，推导编码的氨基酸序列之间的同源性为92.6％～100％；与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株的核苷酸同源性分别为87.9～90.0％、89.4％～90.7％、92.1％～99.7％、91.95～99.4％、40.7％～41.2％、88.2％～89.6％、93.1～96.7％。与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株推导编码的氨基酸序列之间的同源性分别为90.2～92.5％、91.3％～93.8％、93.0％～99.7％、93.8％～99.6％、54.9％～56.9％、90.2％～92.5％、95.9～97.6％。表明国内流行毒株的ORF3基因区域变异较大，证实30份毒株均属美洲型。
把30株流行毒株与国内外已发表的48株PRRSV相应序列进行比较，并建立了遗传进化树。本研究获得的30株流行毒株均属于3个亚群中的亚群Ⅱ，并且ORF3基因序列的同源性和2006至2007年“高热病”期间分离得到的国内代表株较高，达到了97.7％～99.7％。
推导编码氨基酸的比较结果表明，分属于不同亚群的广西不同地区流行的PRRSV毒株在ORF3基因编码蛋白的潜在糖基化位点数7个。分别位于29aa、43aa、50aa、131aa、152aa、160aa、195aa。
本研究通过对PRRSV ORF3基因序列变化的比较，了解PRRS的流行状况，探索高致病性猪繁殖与呼吸综合征变异病毒的变异规律，为控制本病流行打下基础。
猪;繁殖与呼吸综合征病毒;ORF3基因;基因克隆;分子流行病学
广西大学
硕士
预防兽医学
黄伟坚
2008
中文
S858.28
64
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）