mPRβ在猪卵母细胞体外成熟过程中的表达和作用的研究
孕激素膜受体(membrane progestin receptors，mPRs)，是最近发现的一个大的蛋白家族成员，包括α、β和γ三种亚型。以往研究显示，它们在低等脊椎动物卵母细胞成熟过程中起着重要的作用。但是，到现在为止，还没有它们在哺乳动物卵母细胞成熟过程中的表达和作用的相关研究。
为了检测mPR β mRNA是否在猪卵母细胞一卵丘细胞复合体(oocyte-cumulus complexes，COCs)中表达，本实验利用GeneBank上猪mPRβ的eDNA序列设计引物，扩增出了一段1447bp序列，并将所得序列进行了测序和BLAST比对。结果显示，所测得的序列与GeneBank上cDNA序列的同一性为100％，说明mPRβ mRNA在猪的COCs中有表达。随后，用半定量RT-PCR，分析了猪COCs体外成熟过程中，0h，12h，20h，36h和44h五个时期mPR β mRNA的表达情况。结果显示，20h和36h mPR β mRNA的表达量显著高于0h(P(0.05)，其它各组间没有显著差异。在整个成熟过程中，mPRβ mRNA的表达呈先升高后降低的趋势，并在20h达到峰值。为了研究促性腺激素对mPR β mRNA的表达是否有影响，将成熟培养液中的LH或FSH去除。结果显示，去除培养液中的LH或FSH，对mPR β mRNA的表达没有显著的影响。
以上在转录水平上对mPR β在猪COCs中的表达进行了分析。为了进一步在翻译水平上研究mPR β在猪COCs中表达的规律，利用mPR β的一段多肽制备了抗体，进行蛋白分析。Western blotting结果显示，在0h没有mPRβ表达，在20h有高的表达量，而在44h其表达量又降到很低水平。三个时期的表达量之间差异显著(P<0.05)。免疫荧光分析显示，mPR β至少部分定位在卵丘细胞的膜上。而在小鼠的胎儿成纤维细胞(mouse embryo fibroblasts，MEFs)中，mPR β主要定位于内质网上。在猪COCs的成熟培养液中添加10％的抗血清mPR β抗体，可以明显地抑制卵丘细胞的扩展(P<0.05)。最后，通过生物信息学分析发现，这个蛋白可能是通过胞吐参与了卵丘细胞扩展过程。
总之，mPR β mRNA和蛋白都在猪COCs体外成熟过程中，呈特定的表达模式。其亚细胞定位具有组织特异性，并且该蛋白与卵丘细胞的扩展相关。
猪;卵母细胞;体外成熟;蛋白表达;孕激素膜受体
广西大学
硕士
动物遗传育种与繁殖
卢克焕
2008
中文
Q953.3;S828
56
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）