水牛生精上皮细胞体外培养的初步研究
为建立水牛精原细胞增殖及分化的培养体系，本研究以本地水牛睾丸为材料，进行了如下研究：
(1)探讨了水牛曲精细管发育过程中的细胞类型变化规律。结果发现，水牛出生后曲精细管的直径逐渐增大，由初生时的37.5～50.0μm增大到10～12月龄的125.0～150.0μm，生精细胞由初生时的单一性原细胞逐步分化形成精原细胞、精子细胞和精子，其中3～5月龄水牛曲精细管的直径约为75.0～87.5μm，生精细胞主要为精原细胞，是研究精原细胞分离培养的最佳材料。
(2)探讨了水牛睾丸支持细胞的分离、纯化培养方法。结果发现，3～5月龄水牛睾丸组织采用胶原酶、胰蛋白酶两步法消化后，平均每克组织得到2.61×106个细胞，平均活率为89.37％；用差异黏附法和高温培养法(38.5℃培养24h)纯化后，支持细胞纯度达90％以上；RT-PCR检测及测序发现，支持细胞表达GATA4，GDNF，而精原细胞表达GBNF受体。
(3)探讨了水牛精原细胞的分离、纯化及培养方法。结果发现，曲精细管片段培养极容易漂浮，而组合酶消化后再培养，所得精原细胞较多；Pereoll纯化后精原细胞纯度可达62.95％；AKP染色显示，支持细胞呈阴性，管周样细胞和未分化的精原细胞呈阳性，分化的精原细胞表达C-Kit；精原细胞培养4wk后出现单倍体精子细胞，经RT-PCR检测证实，获得单倍体精子细胞特有的基因PRM-2。
以上结果表明，(1)随着水牛睾丸曲精细管的发育，其细胞组合类型发生明显改变，3～5月龄水牛的睾丸曲精细管主要为精原细胞，可用于分离精原细胞：(2)差异黏附法和高温培养法可用于纯化培养水牛支持细胞：(3)组合酶消化培养法培养精原细胞效果优于曲精细管片段法；(4)AKP染色以及C-Kit检测可以鉴定水牛睾丸体细胞，分化及未分化型的精原细胞；(5)水牛精原细胞可用Percoll进行纯化，经体外培养可分裂、分化形成精子细胞。
水牛生精;上皮细胞;体外培养;曲精细管发育;细胞变化;精原细胞分离
广西大学
硕士
动物遗传育种与繁殖
石德顺
2008
中文
S823.833
49
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）