TSA对水牛体细胞增殖及核移植胚胎发育影响的研究
探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对水牛成纤维细胞增殖和Cx43基因表达的影响。传代培养六代的水牛成纤维细胞用不同浓度的TSA处理不同时间，采用MTT法对水牛成纤维细胞增殖情况进行检测，并用实时荧光定量PCR技术对水牛成纤维细胞的Cx43mRNA变化情况进行检测。结果发现，TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有明显的抑制作用，且呈时间、浓度依赖性；适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间可以显著提高Cx43基因的表达水平，且随处理浓度、时间的不同出现动态变化，当TSA处理时间为48h，处理浓度为0.1、0.5、1μmol/L时，Cx43 tuRNA的表达量分别约是对照组的7倍、9倍、11倍，显著高于对照组(P<0.05)。
探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理水牛体细胞核移植胚胎对其随后发育能力的影响。用不同浓度的TSA(0 nmol/L、5 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L)处理核移植重构胚10h，各组间的核移植胚胎分裂率无显著差异(P>0.05)，当TSA处理浓度为50 nmol/L时，重构胚的囊胚发育率显著高于对照组(22.0％Vs 13.0％，P<0.05)。浓度为50 nmol/L的TSA处理核移植重构胚不同时间(0、10、24、36、48h)，核移植胚胎的分裂率各组间无显著差异(P>0.05)；但TSA处理时间为10、24、36、48h的处理组其囊胚发育率均显著高于对照组(P<0.05)，然而各处理组之间囊胚率并无显著差异(P>0.05)，其中TSA处理时间为24h组重构胚的囊胚发育率较高(26.4％)。结果显示，50nmol/L的TSA处理水牛体细胞核移植重构胚24h，能显著提高水牛体细胞核移植效果。
采用免疫荧光染色技术测定了间隙连接蛋白Cx43在水牛体外受精(IVF)胚胎和体细胞核移植(SCNT)胚胎早期发育过程中的表达模式。结果发现，Cx43蛋白在胚胎发育的各个时期均有表达，其中在2、4、8细胞期，Cx43蛋白在两种类型胚胎的卵裂球中均有大量表达，而在桑椹胚和囊胚期，Cx43蛋白的表达明显减弱，且体细胞核移植胚胎中Cx43蛋白的表达明显弱于同时期的体外受精胚胎。
以上研究结果表明：(1)TSA处理对水牛成纤维细胞增殖有抑制作用，并呈时间、浓度依赖性；(2)适宜浓度TSA处理水牛成纤维细胞一定时间可以显著提高Cx43基因的表达水平；(3)适宜浓度的TSA处理水牛体细胞核移植重构胚一定时间可以提高其胚胎发育能力；(4)Cx43蛋白在早期胚胎发育中起着重要的作用，水牛核移植胚胎的Cx43蛋白表达量低可能是其发育潜能较低的主要原因。
TSA抑制剂;水牛成纤维细胞;细胞增殖;Cx43基因表达;核移植胚胎;胚胎发育
广西大学
硕士
动物遗传育种与繁殖
石德顺
2008
中文
S823.836
44
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）