维生素C和E及血清种类对水牛体外受精早期胚胎发育与凋亡影响的研究
本论文研究的主要内容:探讨在胚胎培养液中添加不同浓度的维生素C(vit c)和维生素E(vit e)及二者联合使用对水牛体外受精早期胚胎发育和凋亡的影响，以及比较在成熟液中添加发情水牛血清(EBS)或发情黄牛血清(ECS)对水牛卵母细胞体外成熟早期胚胎发育的效果，为改善水牛体外受精早期胚胎培养液组分及培养系统提供科学依据。论文共分三章，第一章为文献综述、第二章和第三章为试验研究部分。
第二章研究目的:探讨在胚胎培养液中添加不同浓度的维生素C和维生素E及二者联合使用对水牛体外受精早期胚胎发育和凋亡的影响。
方法：抽取来自屠宰场水牛卵巢表面直径为2～6 mm卵泡的卵母细胞，在体外成熟培养后与水牛精子进行体外受精(IVF)，受精后18～20 h将假定受精的卵子移入添加有不同浓度的vit c和vit e培养系统进行培养，受精后2d检查分裂率，6～9 d检查囊胚发育率；用细胞凋亡试剂盒(KGA1032)试剂进行染色，统计囊胚总细胞数、囊胚细胞凋亡率和坏死率。
结果发现：1)在胚胎培养液中添加浓度为100 μmol/L vit c或200 μmol/L vit c，水牛IVF早期胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数都有一定的提高，而D7囊胚率和孵化囊胚率比对照组的低，但差异不显著(P>0.05)。添加高浓度的vitc(200μmol/L)对降低囊胚细胞凋亡率、坏死率和水牛IVF早期胚胎的发育有一定的促进作用，但不显著；2)在胚胎培养液中添加不同浓度(20gmol/L、100μmol/L或200μmol/L)的vite，随着vite浓度的增加，水牛体外受精早期胚胎的卵裂率、囊胚率均有一定的提高，但差异不显著(P>0.05)。添加100μmol/Lvite，受精后D7形成的囊胚的比率以及孵化囊胚率高于对照组，但差异不显著(P>0.05)。对于胚胎凋亡的影响，添加vit e各处理组，其囊胚细胞凋亡率、坏死率都有不同程度的降低，但差异均不显著(P>0.05)；3)联合添加等剂量的各种浓度(20μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)的vit c和vit e，水牛早期胚胎囊胚率和囊胚率，在各处理组与对照组之间没有多大的变化；联合添加等剂量低浓度(20μmol/L)或高浓度(200 gmol/L)的vit c和vit e，对水牛体外受精早期胚胎质量的提高有一定的促进作用，同时细胞凋亡率和坏死率也有一定程度的下降，但差异不显著(P>0.05)：4)用细胞凋亡检测试剂盒KGA1032对水牛囊胚进行染色，能够区分发生凋亡和坏死的细胞。
结果表明：1)在TCM-199培养液中添加200μmol/L vit c，对水牛体外受精早期胚胎发育和降低囊胚细胞凋亡率、坏死率有一定促进作用；2)在TCM-199培养液中添加vit e，有助于促进水牛体外受精早期胚胎发育和降低囊胚细胞凋亡率。添加vit e的浓度以100μmol/L效果最好；3)在TCM-199培养液中联合添加等剂量的vit c和vit e，对水牛体外受精早期胚胎发育率没有明显的促进作用，但对降低胚胎细胞凋亡率、坏死率有促进作用。 第三章研究目的:比较在成熟液中添加发情水牛血清(EBS)或发情黄牛血清(ECS)对促进水牛卵母细胞体外成熟早期胚胎发育的效果。在成熟培养液中分别添加10％体积浓度的EBS和10％体积浓度的ECS对水牛卵母细胞进行体外成熟，经体外受精和体外培养后发现，在。TCM-199成熟液中添加10％EBS，获得了与ECS相似的囊胚率，20.59％VS 21.09％，且D7囊胚率和孵化囊胚率(占囊胚总数的百分比)要高于用ECS成熟的(P<0.05)，但D8囊胚细胞数显著低于用ECS成熟的(P<0.05)。
结果证明，发情水牛血清(EBS)能够应用于水牛卵母细胞的体外成熟体系中。
维生素C;维生素E;血清种类;水牛体外受精;胚胎发育
广西大学
硕士
动物遗传育种与繁殖
张明
2008
中文
S823.834
57
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）