桉树青枯病生物防治研究
本试验通过对植物内生细菌的BOX-PCR指纹图谱分析及鉴定，利用植物内生细菌及链霉菌防治桉树青枯病，对植物内生细菌、链霉菌及根际细菌在桉树体内的运转规律的研究，为桉树青枯病的生物防治打下了基础，主要研究结果如下:
1.植物内生细菌的BOX-PCR指纹图谱分析及鉴定本研究利用植物内生细菌CN017对BOX-PCR技术体系进行了优化，并将筛选出的优化因子应用于不同来源的内生细菌CN008、CN015、CN017、CN030、CN061、CN062、CN063、CN064、CN078及根际细菌WCS358、WCS374、WCS417、7NSK2的BOX-PCR指纹图谱分析，将其中6种细菌的分析结果与它们的16S rDNA序列的聚类分析进行了比较；通过Biolog生理生化鉴定和16S rDNA序列分析，对CN015、CN017、CN064、CN078四种细菌进行了初步的鉴定。试验筛选出适于待测内生细菌的25μL优化体系中dNTP和引物以及Taq酶的用量为:dNTP0.2 mmol/L，引物50pmol，2UTaq酶；对13种细菌的BOX-PCR指纹图谱分析表明，PCR产物在200～2300bp位置有多条特定的电泳带，可较好地揭示不同菌株间的差异；其中6种细菌的BOX-PCR聚群结果与16S rDNA序列分析有较好的一致性，说明BOX-PCR技术是一种快速而有效的DNA指纹技术，尤其适用于分析大量的菌株或分离株。经Biolog生理生化鉴定和16S rDNA序列分析将4种内生细菌初步确定为:CN015为Pseudomonas putida、CN017为P.poae、CN064为P.synxartha、CN078为P.fluorescens。
2.植物内生细菌防治桉树青枯病本试验测定了植物内生细菌CN030、CN064、CN078对青枯病菌的平板拮抗活性，并利用CN015r、CN017r、CN030、CN064、CN078在离体条件下、无菌条件下及土壤系统中进行桉树青枯病的防治研究；为提高其防效，在土壤系统中进行了内生细菌有效载体的筛选。在KB平板培养基上CN078和CN064对青枯菌都有明显的拮抗活性，其中CN078效果最好，抑菌圈达到33.5mm。离体条件下，采用内生细菌与青枯菌菌悬液进行比例混合，CN015r、CN017r、CN064、CN078对桉树青枯病有明显的防治效果，而CN030发病率达到了88.8％没有防治效果；在无菌条件下，青枯病菌对尾叶桉无菌实生苗具有很强的致病性，经筛选确定河沙中青枯菌量为2.5×100CFU·g-1，与对照相比CN017r、CN064、CN078对于桉树青枯病具有较强防治效果，CN030对桉苗的正常生长有一定的影响。在土壤系统中接种青枯病菌15 d后，CN015r、CN017r、CN064防治效果达到差异水平，CN030、CN078与对照相比没有差异。测定的四种载体在土壤系统中，对于对于内生细菌对于桉树青枯病的防治效果没有明显的提高，且四种载体对于桉苗的生长均有一定的影响。
3.利用链霉菌防治桉树青枯病本试验从桉树中进行了内生链霉菌的分离，并对分离到的菌株与内生链霉菌CN120、CN121(从枣树果实中分离)及金色链霉菌、武夷菌素链霉菌、龟裂链霉菌、玫瑰黄链霉菌对于青枯病菌的平板拮抗活性进行了测定，将对桉树青枯病菌具有拮抗活性的菌株在不同的系统中进行了防效测定。试验从尾巨桉中分离到一株链霉菌CN122(初步鉴定为链霉菌)，在平板KB培养基上龟裂链霉菌、武夷菌素链霉菌和CN122对青枯菌都有明显的拮抗活性，其它菌株没有效果。在离体条件下，龟裂链霉菌、CN122处理桉苗在第10d的发病率与对照相比达到显著水平，而武夷菌素链霉菌发病率较对照有所增高；无菌条件下，CN122的发病率与对照相比下降了40％，龟裂链霉菌第20d时发病率与对照相比也存在一定差异。土壤系统中，对第10d的发病率进行统计分析表明，在α=0.05时CN122防治效果达到差异水平，龟裂链霉菌与对照相比没有差异:至15d，龟裂链霉菌、CN122发病率与对照相比达到显著水平。
4.植物内生菌、链霉菌及根际细菌在桉树体内的定殖和运转规律本试验在无菌条件下，对植物内生菌、链霉菌、根际细菌在桉树体内的运转规律进行了研究。结果表明，无菌条件下萌发的桉苗内未检测到可培养的内生细菌；通过浸种处理、桉苗与细菌共培养、叶片接种和菌液蘸根的方法，内生细菌CN017r均可以进入桉树无菌实生苗体内，其中以桉苗与细菌共培养的方法，根部内生细菌定殖的数量最多(7.651g CFU.g-1)，其次是浸种处理和菌液蘸根；通过叶片接种后CN017r能够在接种叶片内很好的定殖，并且向下部叶片运转。CN017r在不同的桉树中均可以定殖，所测三种桉树同一时间根部和茎中段内生细菌CN017r定殖的数量，以邓恩桉最多，其次是尾叶桉和赤桉，第30d时检测只在尾叶桉的顶芽检测到少量内生菌(4.751g CFU.g-1)；内生细菌CN015r、CN017r、CN064、CN078对于尾叶桉并无专化性，都能够在桉苗根部定殖，除CN017r外的三种内生细菌在30d内都没有到达植株顶芽。链霉菌CN122能够在尾叶桉体内定殖，但是定殖数量较内生细菌少，龟裂链霉菌及根际细菌358r、417r虽然在河沙中维持了一定的菌量，但都不能进入尾叶桉体内；通过顶端接种的方法将内生细菌接种于桉树体内，第7d四种不同的内生细菌在桉苗中数量都检测到41gCFU.g-1，CN064达到51gCFU.g-1；而且在第15d和第30d时内生细菌的数量均有一定的增长。生物防治
桉树;青枯病;生物防治
河北农业大学
硕士
森林保护
冉隆贤
2008
中文
S792.39;S763.13
63
2008-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）