HSP25在大鼠牙囊细胞中的表达及生物学意义
目的：本研究检测不同出生时间段大鼠牙囊中热休克蛋白25(heat shock proteins 25，HSP25)的表达情况，以及体外培养大鼠牙囊细胞中HSP25的表达，并利用重组鼠HSP25蛋白(recombinant murine HSP25 protein)刺激体外培养的牙囊细胞，探讨其对牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性的影响。
方法：①分别截取出生1，3，5，7，9，11天的SD大鼠下颌第一磨牙牙胚段，固定包埋后制作石蜡切片，用SABC免疫组化法检测HSP25在各不同时间段牙囊中的表达情况。②在体视显微镜下分离出生第7天SD大鼠的牙囊组织，用酶消化结合组织法体外培养大鼠原代牙囊细胞。取第三代或第四代纯化的牙囊细胞，采用SABC法进行波形丝蛋白和角蛋白染色以鉴定细胞来源。利用间接免疫荧光法检测HSP25在体外培养的大鼠牙囊细胞中的表达。③用不同浓度的重组鼠HSP25蛋白(0、1、10、50、100ng/ml)刺激体外培养的牙囊细胞，在第1、2、3天分别采用MTT比色法检测各组牙囊细胞增殖变化；用流式细胞术检测100ng/ml的重组HSP25蛋白刺激牙囊细胞3天时细胞周期的变化；并检测各浓度重组鼠HSP25刺激牙囊细胞第3、6、9天后ALP活性的变化。
结果：①HSP25在出生第1天和第3天的大鼠牙囊组织内无明显表达，到第5天开始出现表达，以后逐渐增高并一直维持到第11天。②体外培养的大鼠牙囊细胞波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性，提示该细胞来源于问充质而非上皮来源。HSP25在牙囊细胞的胞浆呈阳性表达。③MTT结果示在各时间段下不同浓度HSP25对牙囊细胞的增殖无明显影响；流式细胞术检测100ng/ml的HSP25刺激牙囊细胞3天后，和对照组相比增殖指数(proliferative index，PrI)亦无明显差异。④牙囊细胞在100ng/mID的HSP25刺激9天后ALP活性达到最高，比对照组及低浓度组均有统计学意义。 结论：①HSP25在出生早期的大鼠牙囊组织无表达，随后逐渐增强。②HSP25在体外培养的大鼠牙囊细胞胞浆表达。③体外培养的大鼠牙囊细胞经重组鼠HSP25刺激后，增殖无明显变化。④100ng/ml的重组鼠HSP25刺激体外培养的大鼠牙囊细胞9天后，ALP活性增高。说明HSP25有可能促进牙囊细胞成牙骨质/成骨向分化。
大鼠;牙囊;碱性磷酸酶;细胞增殖
中山大学
硕士
口腔基础医学
凌均棨
2008
中文
R78;R329.28
46
2008-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）