中药提取物中胰岛素受体激酶激动剂的筛选
目的:能直接激动胰岛素受体激酶(IRTK)的非肽小分子化合物在抗糖尿病新药和保健食品开发方面具有巨大前景。利用丰富的抗糖尿病中药资源，应用报告基因药物筛选细胞模型筛选具有激活IRTK作用的活性部位，并进一步分离鉴定抗糖尿病的有效成分，为开发一种更安全有效的治疗2型糖尿病新药提供基础。
方法:①筛选条件的优化：通过讨论不同的细胞接种量、诱导表达时间和检测试剂用量、溶剂二甲亚砜用量以及中药粗提物体系的影响，优化筛选条件。②中药提取库的建立：广泛收集临床治疗糖尿病中药，通过用药频率分析确定候选中药；采用以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水为溶媒体系的系统溶剂法提取。③中药提取物对Luc表达水平的影响检测：配制不同浓度的中药提取液作为高、中、低浓度受试样品处理细胞，检测Luc信号值并计算诱导表达率。④中药活性部位的分离：利用硅胶柱层析分离显效中药提取部位。⑤中药活性部位分离流份对Luc表达水平的影响检测：配制不同浓度的分离流份处理细胞，检测诱导表达率。⑥有效流份的鉴定：采用薄层色谱法鉴定有效流份。
结果:①经试验，细胞接种量15,000/孔，诱导表达时间8h，LAR稀释4倍使用，溶剂二甲亚砜的终浓度不超过0.1％为最佳筛选条件。中药粗提物复杂体系对于IRTK的特异性激动剂胰岛素以及特异性抑制剂AGl024对UC诱导表达作用无明显干扰作用。②通过系统溶剂提取，建立了中药提取库，作为筛选源。③经检测，中药TCM001、TCM002乙醇提取物能显著升高Luc诱导表达水平，其诱导表达率分别为.2.92倍和2.58倍。⑤分离中药TCM001乙醇提取物，得到10个分离流份。⑥检测结果表明中药TCM001乙醇提取物分离流份3和流份5能显著提高Luc诱导表达水平，且这一作用与细胞活力变化无关。⑦薄层色谱鉴定表明分离流份3和流份5可能含有中药TCM001主要成分2＃、4＃5＃，且这三种成分均有提高LUC诱导表达水平的作用。
结论:通过建立抗糖尿病中药提取库并筛选具有IRTK激动剂作用的活性部位，发现中药TCM001乙醇提取物可能具有激活IRTK活性，并且这一活性与中药。TCM001主要成分2＃、4＃和5＃有密切关系，为分离鉴定中药抗糖尿病有效成分，进而为抗糖尿病新药设计先导化合物提供了基础。
中药提取物;胰岛素受体;激酶激动剂;基因药物;药物筛选;2型糖尿病
西华大学
硕士
食品科学
陈祥贵
2008
中文
R283;R587.1
62
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）