姜黄素对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)对人晶状体上皮细胞株SRA01/04(humanlens epithelial cell line SRA01/04,HLEC SRA01/04)增殖的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系。
方法:(1)细胞培养:将冻存的HLEC复苏后,置于含10%dx牛血清的DMEM培养基中培养,收集指数生长期细胞进行以下实验;(2)四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)比色法分别测定不同浓度(0、5、10,20、30mg/L)的CUR作用于HLEC不同时间(12h、24h、48h)后细胞生长抑制的情况:(3)流式细胞术(flow cytometric analysis,FCM)分别检测不同浓度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR用于HLEC 24h后早期细胞凋亡率的情况;(4)倒置生物相差显微镜及DAPI免疫荧光染色(4,6-diamidino-2-phenylindole dihydro-chloride,DAPI)分别观察不同浓度(0、5、10、20,30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后的形态学改变;(5)免疫组织化学分别观察不同浓度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后Caspase-3蛋白的表达情况。实验结果进行统计学分析。
结果: (1)MTT比色法实验结果显示,作用12h和24h:20mg/L和30mg/L浓度组对HLEC有明显的抑制作用;作用48h:10mg/L、20mg/L、30mg/L浓度组对HLEC有明显的抑制作用;随药物浓度增加,HLEC生长抑制率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。5mg/L和10mg/L浓度组:生长抑制率48h和24h>12h(P均<0.05),但24h与48h间差异无统计学意义(P>0.05);20mg/L浓度组:生长抑制率48h>24h>12h(P均>0.05);30mg/L浓度组:生长抑制率48h>24h和12h(P均<0.05),但12h与24h间差异无统计学意义(P>0.05);随作用时间延长,HLEC生长抑制率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。0.1%DMSO对照组:生长抑制率12h、24h、48h间差异无统计学意义(P>0.05),提示0.1%DMSO对照组经过48h作用后,HLEC生长抑制率无明显变化。(2)FCM检测表明,不同浓度的CUR作用于HLEC 24h后,早期细胞凋亡率均随浓度增加而明显增加,呈剂量-效应关系,其顺序为浓度30mg/L组>20mg/L组>10mg/L组>5mg/L组和空白对照组,各组间差异有统计学意义(P <0.05),但5mg/L浓度组和空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)不同浓度的CUR作用于HLEC 24h后观察细胞形态学改变,倒置生物相差显微镜下可见细胞体积缩小、细胞皱缩、细胞浆可见大量空泡、细胞核裂解;DAPI免疫荧光染色可见细胞核固缩、溶解碎裂、产生凋亡小体,呈现细胞凋亡的形态学改变,且随药物浓度增加,上述变化更加明显。而对照组细胞形态规则,细胞核呈现均匀的荧光染色。(4)免疫组织化学可见随CUR浓度增加,用药组Caspse-3蛋白的表达增强,其增强的顺序为浓度30mg/L组>20mg/L和10mg/L组>5mg/L组>0mg/L组,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而20mg/L和10mg/L浓度组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:姜黄素对人晶状体上皮细胞的增殖有抑制作用和诱导其凋亡的作用,且呈明显的剂量.效应与时间.效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。
姜黄素;晶状体;上皮细胞株;细胞凋亡;后发性白内障;抑制作用
四川大学
硕士
眼科学
刘谊
2007
中文
R776
46
2008-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)