姜黄素对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)对人晶状体上皮细胞株SRA01/04(humanlens epithelial cell line SRA01/04，HLEC SRA01/04)增殖的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系。
方法:(1)细胞培养：将冻存的HLEC复苏后，置于含10％dx牛血清的DMEM培养基中培养，收集指数生长期细胞进行以下实验；(2)四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)比色法分别测定不同浓度(0、5、10,20、30mg/L)的CUR作用于HLEC不同时间(12h、24h、48h)后细胞生长抑制的情况：(3)流式细胞术(flow cytometric analysis，FCM)分别检测不同浓度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR用于HLEC 24h后早期细胞凋亡率的情况；(4)倒置生物相差显微镜及DAPI免疫荧光染色(4，6-diamidino-2-phenylindole dihydro-chloride，DAPI)分别观察不同浓度(0、5、10、20,30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后的形态学改变；(5)免疫组织化学分别观察不同浓度(0、5、10、20、30mg/L)的CUR作用于HLEC 24h后Caspase-3蛋白的表达情况。实验结果进行统计学分析。
结果: (1)MTT比色法实验结果显示，作用12h和24h：20mg/L和30mg/L浓度组对HLEC有明显的抑制作用；作用48h：10mg/L、20mg/L、30mg/L浓度组对HLEC有明显的抑制作用；随药物浓度增加，HLEC生长抑制率增加，差异有统计学意义(P<0.05)。5mg/L和10mg/L浓度组：生长抑制率48h和24h>12h(P均<0.05)，但24h与48h间差异无统计学意义(P>0.05)；20mg/L浓度组：生长抑制率48h>24h>12h(P均>0.05)；30mg/L浓度组：生长抑制率48h>24h和12h(P均<0.05)，但12h与24h间差异无统计学意义(P>0.05)；随作用时间延长，HLEC生长抑制率增加，差异有统计学意义(P<0.05)。0.1％DMSO对照组：生长抑制率12h、24h、48h间差异无统计学意义(P>0.05)，提示0.1％DMSO对照组经过48h作用后，HLEC生长抑制率无明显变化。(2)FCM检测表明，不同浓度的CUR作用于HLEC 24h后，早期细胞凋亡率均随浓度增加而明显增加，呈剂量-效应关系，其顺序为浓度30mg/L组>20mg/L组>10mg/L组>5mg/L组和空白对照组，各组间差异有统计学意义(P <0.05)，但5mg/L浓度组和空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)不同浓度的CUR作用于HLEC 24h后观察细胞形态学改变，倒置生物相差显微镜下可见细胞体积缩小、细胞皱缩、细胞浆可见大量空泡、细胞核裂解；DAPI免疫荧光染色可见细胞核固缩、溶解碎裂、产生凋亡小体，呈现细胞凋亡的形态学改变，且随药物浓度增加，上述变化更加明显。而对照组细胞形态规则，细胞核呈现均匀的荧光染色。(4)免疫组织化学可见随CUR浓度增加，用药组Caspse-3蛋白的表达增强，其增强的顺序为浓度30mg/L组>20mg/L和10mg/L组>5mg/L组>0mg/L组，与空白对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而20mg/L和10mg/L浓度组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:姜黄素对人晶状体上皮细胞的增殖有抑制作用和诱导其凋亡的作用，且呈明显的剂量．效应与时间．效应关系，可望成为后发性白内障的防治药物。
姜黄素;晶状体;上皮细胞株;细胞凋亡;后发性白内障;抑制作用
四川大学
硕士
眼科学
刘谊
2007
中文
R776
46
2008-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）