KH902玻璃体腔注射液配方的初步筛选试验
第1部分KH902的溶剂免眼玻璃体腔注射的初步筛选试验
1.目的
脉络膜新生血管造成进行性、不可逆的中心视力丧失,目前尚无理想的治疗方法。近来研究发现促血管生长因子水平上调在眼部新生血管子之一。因此,目前研究热点集中在抗VEGF的治疗上。KH902是一种通过玻璃体腔注射给药的新型抗VEGF制剂。本实验观察KH902的6种不同备选溶剂玻璃体腔注射后可能存在的眼部毒性作用,以筛选最佳的溶剂方案。
2.方法
2.1 15只普通级健康新西兰白兔,随机分为7个组。注药前裂隙灯显微镜及+120D前置镜检查眼前节及眼底,测定眼压,行ERGs检查。0组设为对照组,其余6组玻璃体腔注射等容积的溶剂:溶剂1组为histidine+9%trehalose+0.05%Tween-20;溶剂2组为succinate+9%trehalose+0.05%Tween-20;溶剂3组为PB+0.05%Tween-20;溶剂4组为succinate+9%trehalose+0.05%Tween-20+6%甘露醇;溶剂5组为succinate+9%trehalose+0.05%Tween-20+0.6%甘露醇;溶剂6组为PBS。
2.2 注药后24h、48h、1周、2周观察眼内炎症反应情况、玻璃体及视网膜情况。
2.3 注药后2h、4h、8h、24h分别检测其眼压变化情况。
2.4 注药后2周行视网膜电图(ERGs)检查,测最大混合反应,记录a波及b波振幅。
2.5 注药后20天摘除动物眼球,以多聚甲醛固定,包埋切片后常规HE染色,光学显微镜观察视网膜各层结构,并在高倍镜下随机选取5个视野对视网膜神经节细胞进行计数。
2.6统计学软件分析每组注药前后及同期实验眼眼压、a波及b波振幅、视网膜神经节细胞计数的差异。
3.结果
3.1 溶剂3、5组各1眼及溶剂6组2眼出现了较严重的炎症反应。溶剂4组中有1眼出现玻璃体混浊。
3.2 溶剂1组1眼、溶剂2组3眼、溶剂4组2眼、溶剂5组1眼、溶剂6组2眼出现不同程度的晶状体混浊。
3.3 溶剂1组和4组分别有1眼出现视网膜点状出血。
3.4 溶剂1组注射后2h与注射前相比眼压明显降低。溶剂4组注射后8h与注射前相比眼压明显升高。溶剂5组注射后2h、24h眼压明显降低。
3.5 溶剂1组及4组HE染色光镜观察,视网膜结构层次清晰,内、外核层水肿明显,神经节细胞层细胞明显减少。溶剂1、2、3、4、5组的神经节细胞层细胞计数均减少,与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05)。
3.6 根据上述结果分析,在本实验中,溶剂1刺激反应较轻,对眼压无明显影响,可疑晶状体毒性,但需排除操作因素,可疑视网膜毒性。溶剂2刺激反应较轻,可能一过性升高眼压,可疑晶状体毒性,未见明显视网膜毒性。溶剂3刺激反应较轻,对眼压无明显影响,未见明显晶状体、视网膜毒性。溶剂4刺激反应较轻,对眼压无明显影响,可疑晶状体毒性,可疑视网膜毒性。溶剂5刺激反应较重,可能降低眼压,可疑晶状体毒性,但需排除操作因素,未见明显视网膜毒性。溶剂6刺激反应较重,对眼压无明显影响,可疑晶状体毒性,未见明显视网膜毒性。
4.结论
在备选溶剂中溶剂3(PB+0.05%Tween-20)毒性作用最小,最适合作为KH902的溶剂。
第2部分 KH902制剂猴眼玻璃体腔注射的初步筛选试验
1.目的
国内外已有大量基础研究及临床试验证明抗VEGF制剂治疗CNV的有效性。目前国外已有治疗CNV的抗VEGF药物上市,而国内尚处于研究阶段。KH902是重组人血管内皮生长因子受体.抗体融合蛋白注射液。
本部分实验对比3种不同溶剂配制的KH902玻璃体腔注射液的安全性,以确定最佳的制剂方案。
2.方法
2.1 8只普通级恒河猴随机分为4组,玻璃体腔注射前进行眼压测量、眼前节、眼底及ERGs检查。对照组注射生理盐水,其余3组为KH902制剂1组注射KH902制剂1,KH902制剂2组注射KH902制剂2,KH902制剂3组注射KH902制剂3。
2.2 注药后24h、48h、72h观察眼内炎症反应、玻璃体及视网膜情况。
2.3 注药后0.5h、24h、48h分别检测其眼压变化情况。
2.4 注药后5天行视网膜电图(ERGs)检查,记录a波及b波振幅。
2.5 注药后20天处死动物,即刻摘除眼球,固定液固定眼球,包埋切片后常规HE染色,光学显微镜观察眼部结构。
2.6 统计学软件分析每组注药前后及同期实验眼眼压、a波及b波振幅。
3.结果
3.1 KH902制剂1组中2眼注射后第1天出现眼前房渗出物,阿托品眼膏点眼后前房渗出消失,注射后5天裂隙灯显微镜下可见有轻度玻璃体细胞(+~++),KH902制剂3组中1眼注射后出现前房渗出,未予处理自愈。
3.2 眼底检查:各组动物注药后各时间点眼底未见异常。
3. 3 注药后0.5h、24h及48h眼压与给药前比较,各组未见显著性差异。
3.4 ERGs:KH902制剂1组可见给药后混合反应及视锥细胞振幅较给药前降低。对照组及其余两注射组注药前后ERGs无明显改变。
3.5 组织学检查KH902制剂1组和.KH902制剂2组发现有前部葡萄膜炎(3眼),KH902制剂2组发生视网膜神经纤维层血管周围炎(2眼),KH902制剂2组有结膜慢性炎症(2眼),KH902制剂3组眼球未见明显异常。
结论
KH902制剂1组和KH902制剂2组发现有轻度眼内炎症的病理学改变。KH902制剂1组注药后ERGs混合反应及视锥细胞振幅较给药前降低,存在视网膜毒性作用。KH902制剂3组未观察到眼部异常改变。因此,相比之下,KH902制剂3更适合玻璃体腔注射给药方式。
玻璃体腔注射;抗血管内皮生长因子;KH902;筛选试验;视网膜
四川大学
硕士
眼科学
张军军
2007
中文
R965.1;R988.1
75
2008-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)