KH902玻璃体腔注射液配方的初步筛选试验
第1部分KH902的溶剂免眼玻璃体腔注射的初步筛选试验
1．目的
脉络膜新生血管造成进行性、不可逆的中心视力丧失，目前尚无理想的治疗方法。近来研究发现促血管生长因子水平上调在眼部新生血管子之一。因此，目前研究热点集中在抗VEGF的治疗上。KH902是一种通过玻璃体腔注射给药的新型抗VEGF制剂。本实验观察KH902的6种不同备选溶剂玻璃体腔注射后可能存在的眼部毒性作用，以筛选最佳的溶剂方案。
2．方法
2．1 15只普通级健康新西兰白兔，随机分为7个组。注药前裂隙灯显微镜及+120D前置镜检查眼前节及眼底，测定眼压，行ERGs检查。0组设为对照组，其余6组玻璃体腔注射等容积的溶剂：溶剂1组为histidine+9％trehalose+0.05％Tween-20；溶剂2组为succinate+9％trehalose+0.05％Tween-20；溶剂3组为PB+0．05％Tween-20；溶剂4组为succinate+9％trehalose+0.05％Tween-20+6％甘露醇；溶剂5组为succinate+9％trehalose+0.05％Tween-20+0.6％甘露醇；溶剂6组为PBS。
2．2 注药后24h、48h、1周、2周观察眼内炎症反应情况、玻璃体及视网膜情况。
2．3 注药后2h、4h、8h、24h分别检测其眼压变化情况。
2．4 注药后2周行视网膜电图(ERGs)检查，测最大混合反应，记录a波及b波振幅。
2．5 注药后20天摘除动物眼球，以多聚甲醛固定，包埋切片后常规HE染色，光学显微镜观察视网膜各层结构，并在高倍镜下随机选取5个视野对视网膜神经节细胞进行计数。
2．6统计学软件分析每组注药前后及同期实验眼眼压、a波及b波振幅、视网膜神经节细胞计数的差异。
3．结果
3．1 溶剂3、5组各1眼及溶剂6组2眼出现了较严重的炎症反应。溶剂4组中有1眼出现玻璃体混浊。
3．2 溶剂1组1眼、溶剂2组3眼、溶剂4组2眼、溶剂5组1眼、溶剂6组2眼出现不同程度的晶状体混浊。
3．3 溶剂1组和4组分别有1眼出现视网膜点状出血。
3．4 溶剂1组注射后2h与注射前相比眼压明显降低。溶剂4组注射后8h与注射前相比眼压明显升高。溶剂5组注射后2h、24h眼压明显降低。
3．5 溶剂1组及4组HE染色光镜观察，视网膜结构层次清晰，内、外核层水肿明显，神经节细胞层细胞明显减少。溶剂1、2、3、4、5组的神经节细胞层细胞计数均减少，与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05)。
3．6 根据上述结果分析，在本实验中，溶剂1刺激反应较轻，对眼压无明显影响，可疑晶状体毒性，但需排除操作因素，可疑视网膜毒性。溶剂2刺激反应较轻，可能一过性升高眼压，可疑晶状体毒性，未见明显视网膜毒性。溶剂3刺激反应较轻，对眼压无明显影响，未见明显晶状体、视网膜毒性。溶剂4刺激反应较轻，对眼压无明显影响，可疑晶状体毒性，可疑视网膜毒性。溶剂5刺激反应较重，可能降低眼压，可疑晶状体毒性，但需排除操作因素，未见明显视网膜毒性。溶剂6刺激反应较重，对眼压无明显影响，可疑晶状体毒性，未见明显视网膜毒性。
4．结论
在备选溶剂中溶剂3(PB+0.05％Tween-20)毒性作用最小，最适合作为KH902的溶剂。
第2部分 KH902制剂猴眼玻璃体腔注射的初步筛选试验
1．目的
国内外已有大量基础研究及临床试验证明抗VEGF制剂治疗CNV的有效性。目前国外已有治疗CNV的抗VEGF药物上市，而国内尚处于研究阶段。KH902是重组人血管内皮生长因子受体．抗体融合蛋白注射液。
本部分实验对比3种不同溶剂配制的KH902玻璃体腔注射液的安全性，以确定最佳的制剂方案。
2．方法
2．1 8只普通级恒河猴随机分为4组，玻璃体腔注射前进行眼压测量、眼前节、眼底及ERGs检查。对照组注射生理盐水，其余3组为KH902制剂1组注射KH902制剂1，KH902制剂2组注射KH902制剂2，KH902制剂3组注射KH902制剂3。
2．2 注药后24h、48h、72h观察眼内炎症反应、玻璃体及视网膜情况。
2．3 注药后0.5h、24h、48h分别检测其眼压变化情况。
2．4 注药后5天行视网膜电图(ERGs)检查，记录a波及b波振幅。
2．5 注药后20天处死动物，即刻摘除眼球，固定液固定眼球，包埋切片后常规HE染色，光学显微镜观察眼部结构。
2．6 统计学软件分析每组注药前后及同期实验眼眼压、a波及b波振幅。
3．结果
3．1 KH902制剂1组中2眼注射后第1天出现眼前房渗出物，阿托品眼膏点眼后前房渗出消失，注射后5天裂隙灯显微镜下可见有轻度玻璃体细胞(+～++)，KH902制剂3组中1眼注射后出现前房渗出，未予处理自愈。
3．2 眼底检查：各组动物注药后各时间点眼底未见异常。
3. 3 注药后0.5h、24h及48h眼压与给药前比较，各组未见显著性差异。
3．4 ERGs：KH902制剂1组可见给药后混合反应及视锥细胞振幅较给药前降低。对照组及其余两注射组注药前后ERGs无明显改变。
3．5 组织学检查KH902制剂1组和．KH902制剂2组发现有前部葡萄膜炎(3眼)，KH902制剂2组发生视网膜神经纤维层血管周围炎(2眼)，KH902制剂2组有结膜慢性炎症(2眼)，KH902制剂3组眼球未见明显异常。
结论
KH902制剂1组和KH902制剂2组发现有轻度眼内炎症的病理学改变。KH902制剂1组注药后ERGs混合反应及视锥细胞振幅较给药前降低，存在视网膜毒性作用。KH902制剂3组未观察到眼部异常改变。因此，相比之下，KH902制剂3更适合玻璃体腔注射给药方式。
玻璃体腔注射;抗血管内皮生长因子;KH902;筛选试验;视网膜
四川大学
硕士
眼科学
张军军
2007
中文
R965.1;R988.1
75
2008-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）