尼莫地平对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠视神经炎干预的实验研究
目的：视神经炎(Optic Neuritis，ON)是累及视神经的急、亚急性炎性或脱髓鞘过程。本实验通过实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Allergic Encephalomyelitis，EAE)动物模型的建立，观察不同时间点视神经的形态学改变，为脱髓鞘性视神经炎的研究建立实验平台。同时运用Ca<'2+>拮抗剂尼莫地平对EAE大鼠视神经炎进行干预，通过免疫组化检测神经微丝蛋白(NF-200)、Fas在大鼠视神经中的表达，探讨Ca<'2+>拮抗剂尼莫地平对脱髓鞘性视神经炎中的作用，为脱髓鞘性视神经炎的治疗提供新的方法和实验依据。
方法：(1)以豚鼠脑脊髓匀浆加完全弗式佐剂(Complete FreundAdjuvant，CFA)作为抗原，给予12只雌性Wistar大鼠足垫皮下注射，另外在足背皮内注射百日咳杆菌，建立大鼠EAE模型(第8、12、18、30天4个检测时间点各3只)。4只大鼠做正常对照。观察动物的临床表现，按照Koh评分标准评分。分别于免疫后第8、12、18、30天处死动物，取视神经标本，分别做HE染色、髓鞘特殊染色和电镜观察。(2)将36只雌性Wistar大鼠随机分成三组：正常对照组4只；EAE模型组和尼莫地平干预组各16只(第8、12、18、30天4个检测时间点各4只)。从免疫后第1天起，给予动物药物干预。尼莫地平的计量为1mg.kg<'-1>.d<'-1>灌胃治疗，正常对照组和EAE模型组用等量的生理盐水替代。观察动物的临床表现，按照Koh评分标准评分。分别于免疫后第8、12、18、30天处死动物，取视神经标本，用免疫组化方法检测大鼠视神经中NF200、Fas的表达。
结果：(1)所建立EAE动物模型的临床表现、病理变化等方面均符合EAE的临床和病理特征。EAE模型组各个时间段视神经均发生了不同程度的形态学改变：光镜下表现为不同程度的神经纤维空泡样变性，轴束不规则肿胀，淋巴细胞浸润，大量胶质细胞和胶原组织形成增生组织成网状。电镜下主要表现为轴突内空泡样变性、髓鞘松解、脱落、微丝微管消失等。(2)EAE模型组与尼莫地平干预组和正常对照组相比较，NF200染色阳性轴索数量明显减少，Fas的表达显著增加，EAE模型组、尼莫地平干预组及正常组各指标相比较均有显著性差异。
结论：(1)本实验建立的EAE动物模型成功、稳定、可靠。EAE大鼠视神经有淋巴细胞浸润，髓鞘松解，其视神经与正常大鼠相比较，确实发生了较为严重的病理学改变。该动物模型可用于脱髓鞘性视神经炎的研究。(2)Ca<'2+>拮抗剂尼莫地平可上调NF200及下调Fas在视神经中的表达。提示Ca<'2+>拮抗剂尼莫地平在脱髓鞘性视神经炎的发病中有保护作用。
视神经炎;自身免疫性脑脊髓炎;钙离子拮抗剂;神经微丝蛋白;脱髓鞘;尼莫地平
重庆医科大学
硕士
眼科学
李平华
2007
中文
R774.6;R965
55
2008-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）