齐墩果酸对白血病细胞中VEGF表达的影响及其机制的研究
目的：本研究的目的在于通过检测人白血病细胞株HL-60、K562在常氧及缺氧条件下并在齐墩果酸的影响下，缺氧诱导因子1 α(HIF-1 α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、诱导型-氧化氮合酶(iNOS)蛋白及mRNA表达的变化情况，进一步探讨它们之间相互关系。为抗白血病血管新生这一新的治疗靶点提供重要的研究依据。
方法：建立HL-60、K562细胞体外低氧培养模型。MTT法检测不同浓度齐墩果酸对K562细胞的生存影响。采用RT-PCR和Western blot分别检测齐墩果酸对常氧及缺氧48小时后白血病HL-60、K562细胞HIF-1 α、VEGF和iNOS的mRNA及蛋白的表达变化。ELISA技术检测齐墩果酸对常氧及缺氧白血病HL-60、K562细胞培养液中VEGF含量的影响。
结果：
1．药物对细胞抑制增殖的作用：采用MTT比色法检验结果显示：同一时间点不同浓度的OA(40、60、80、100gmol/1)对K562细胞的抑制作用，与空白对照组比较，具有统汁学意义(P<0.05)：100μmol/l与80μmol/l的约物刈K562细胞生长抑制作用无统计学意义(P>0.05)。同一浓度在不同时间点(12、24、48、72h)K562细胞的抑制作用与对照组比较，均有统计学意义(P<0.05)。GA作用K562细胞72h与48h的抑制率无统计学意义(P>0.05)。OA对K562细胞表现增殖抑制效应呈时间、剂量依赖性，其作用的最适浓度为80μmol/l，最适时间为48h。
2．半定量RT-PCR法结果显示：HIF-1 α、VEGF、iNOS的mRNA在各组都有不同程度的表达，缺氧组与常氧组比较表达明显增强(P<0.05)，OA处理组与对照组比较表达明显受抑制(P<0.05)齐墩果酸可明显抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS mRNA表达。应用Spearman等级相关法分析HIF-1 α分别和VEGF、iNOSmRNA表达的相关性，结果显示：在HL-60细胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(Rs=0.87580，P=0.0044)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.96826，P=0.0001)；在K562细胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(Rs=0.83652，P=0.00963)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.89123,P=0.0030)可见HIF-1α和VEGF、iNOS基因在转录水平上具有相关性。
3. westem blot法结果显示：HIF-1α、VEGF、iNOS的蛋白在各组都有不同程度的表达，缺氧组与常氧组比较表达明显增强(P<0.05)，OA处理组与对照组比较表达明显受抑制(P<0.05)齐墩果酸可明显抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS蛋白表达。在HL-60细胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表达之间均呈正相关，相关系数分别为0.98488、0.82713、0.89478(P<0.01)在K562细胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1 α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表达之间均呈正相关，相关系数分别为0.98354、0.96190、0.96775 (P<0.01)。
结论：常氧条件下，HL-60、K562细胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白低表达。低氧条件下，HL-60、K562细胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白表达均显著增加，与常氧组比较差异有显著性。在HL-60、K562细胞株中，HIF-1 α、iNOS、VEGF蛋白的表达与HIF-1 α、iNOS、VEGFmRNA的表达同步。并且HIF-1 α、VEGF及iNOS的表达两两具有正相关。齐墩果酸可以抑制HL-60、K562细胞在常氧及低氧条件下HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白的表达。这种机制是通过转录因子HIF-1 α实现的。
齐墩果酸;HL-60细胞;K562细胞;白血病
佳木斯大学
硕士
生物化学与分子生物学
张鹏霞;崔玉东
2007
中文
R733.7
63
2007-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）