α-2b干扰素单克隆抗体的制备、鉴定及检测方法研究
目的：建立a-2b干扰素(interferon a2b，IFN-a2b)杂交瘤细胞株，对其分泌的特异性IFN-a2b单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)进行生物学特性鉴定，并将之作为诊断试剂，建立IFN-a2b双抗体夹心ELJSA检测方法。
方法：采用杂交瘤细胞技术，以惠赠的a-2b干扰素(IFN-a2b)和白蛋白融合a-2b干扰素(HSA-IFN-a2b)抗原蛋白作为免疫原，分别免疫。BALB/c小鼠，取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA法鉴定阳性克隆和有限稀释法克隆培养，共制备出8株能持续分泌抗IFN-a2b McAbs的杂交瘤细胞株。对McAbs进行鉴定分析，对杂交瘤细胞的染色体进行分析；采用鼠单抗定型Immunotype<'TM>试剂盒进行亚型分析；间接ELISA法测定了效价、相对亲和常数；Western blot法、免疫组化法确定McAbs的特异性；并对IFN-a2b McAbs用辣根过氧化物酶标记，进行了初步的应用。
结果：获得8株能稳定分泌高效价IFN-a2b McAbs的杂交瘤细胞株。184、11E2、987、7E8、16F11抗体亚型为IgG1/k类，4H8、13G4为IgG2a/k类，12F3为IgG2b/k类。杂交瘤细胞染色体数目为100条左右。间接ELISA法检测细胞培养上清效价为10<'5>～10<'6>，腹水效价为10<'5>～10<'7>。间接ELISA法检测亲和力依次为12F3>13G4>184>4H8>987>7E8>11E2>16F11。Western blot实验、免疫组化实验证明：8株McAbs与IFN-a2b蛋白均有特异性反应。成功的对IFN-a2b McAbs用辣根过氧化物酶标记，但是单抗间不能配对。
结论：制备了8株抗IFN-a2b的McAbs，均具有良好的特异性和亲和力；并对IFN-a2bMcAbs用HRP成功的进行了标记，但其单抗间不能配对。
干扰素;单克隆抗体;杂交瘤;酶联免疫吸附;生物学特性;免疫组化
河南师范大学
硕士
动物学
张红绪
2007
中文
Q813.2
70
2007-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）