甘薯G病毒和地黄花叶病毒外壳蛋白基因对甘薯和地黄遗传转化的研究
本文利用甘薯G病毒(SPVG)的外壳蛋白(CP)基因和地黄花叶病毒(ReMV)的外壳蛋白(CP)基因分别对甘薯和地黄进行了遗传转化。结果表明：
(1)利用SPVG CP基因，通过中间载体pROK219将SPVG CP基因克隆到双元植物表达载体pBIN19上，构建了SPVG CP基因的植物表达载体pBSPCP。利用直接冻融转化法将pBSPCP转入土壤农杆菌LBA4404中，在农杆菌的介导下，转化甘薯品种豫薯12号、北京553、SL-19和安平1号，获得了转SPVG CP基因的再生植株。对再生甘薯植株进行了PCR、斑点杂交检测，初步证明获得了甘薯品种北京553的转基因植株。
(2)分别建立了豫薯12号、北京553和SL-19三个甘薯品种的悬浮细胞体系。其中豫薯12号的悬浮细胞体系已经悬浮了6个月，获得了增殖迅速、分散程度良好的胚性细胞悬浮培养系，可以用于遗传转化；北京553、SL-19的悬浮细胞体系已经悬浮了3个月，悬浮细胞多为小细胞团，颗粒较大，胚性细胞居多。利用SPVG CP基因的植物表达载体，在土壤农杆菌介导下转化了悬浮培养120d的豫薯12号的胚性细胞。
(3)以地黄“85-5”无菌苗为材料，对地黄叶片再生系统及其对卡那霉素和羧苄西林钠的天然耐性进行了初步研究。MS+6-BA 2.0 mg·L<'-1>+NAA 0.05mg·L<'-1>是叶片再生的最适培养基；在地黄遗传转化中，卡那霉素的筛选压和羧苄西林钠的抑菌浓度分别以20mg·L<'-1>和400mg·L<'-1>为宜。利用地黄花叶病毒外壳蛋白基因的植物表达载体，在土壤农杆菌介导下，对地黄品种“85-5”进行遗传转化，获得了地黄的再生植株。
甘薯;地黄;甘薯G病毒;地黄花叶病毒;外壳蛋白基因;植物表达载体;遗传转化
河南师范大学
硕士
植物学
李明军;张振臣
2007
中文
Q943.2;S330
63
2007-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）