VEGF和iNOS作为缺氧性视网膜病变干预靶点的实验研究
[研究背景]新生血管生成是缺氧性视网膜病变的主要病理变化之一.有很多促血管生成因子参与了这个过程.本研究拟评价血管内皮生长因子(VaSCtular endothelial growth factor,VEGF)和诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)作为缺氧性视网膜病变中新生血管生成的干预靶点的价值；分别应用VEGF单克隆抗体Bevacizumab、iNOS抑制剂氨基胍(aminogtJanidine,AG)靶向抑制VEGF、iNOS后,观察在信号转导网络中,其细胞信号通路的代偿性变化,评价单药应用BevaCizumab、AG或联合应用两种药物对组织内'VEGF和iNOS表达和视网膜新生血管形成的影响,为临床应用(单)多靶点药物抑制视网膜缺氧性病变提供实验证据.
[资料和方法]用RT-PCR、免疫组织化学(immunohistochemistrystaining,IHC)、western blot方法检测VEGF和iNOS在氧诱导的新生血管小鼠的模型中视网膜上早期阶段的表达特征；用RT-PCR、western b10t方法检测VEGF和iNOS在低氧环境下(O<,2>2﹪)的视网膜母细胞瘤细胞中的表达特征；在氧诱导的视网膜病变的小鼠模型中用VEGF单克隆抗体BevaciZumab和iNOS抑制剂氨基胍(AG)靶向抑制VEGF、iNOS后,采用RT-PCR、IHC、视网膜荧光血管铺片及透射电镜观察视网膜上VEGF和iNOS表达的特征、视网膜新生血管形成以及组织形态结构的变化.
[结果]小鼠视网膜上VEGF和iNOS的mRNA和蛋白表达水平均上调,并呈较为明显的时间依赖性特征,其中VEGF表达高峰在6h,iNOS表达高峰在2h,均以视网膜的节细胞层表达变化明显.RB细胞中VEGF和iNOS的mRNA和蛋白表达水平也均上调,呈较为明显的时间依赖性特征,表达特征与在动物模型中表达基本一致.在干预组中,VEGF在Bevacizumalb组表达水平明显上升,而在AG组和联合用药组表达水平下降.iNOS表达水平在Bevacizumab组表达水平无明显改变,而在AG组和联合用药组表达水平下降.Bevacizumab和氨基胍(AG)可以明显抑制氧诱导的小鼠新生血管模型中新生血管的形成.三个干预组中的血管内皮细胞数与NS组和对照组相比具有显著统计学差异(P<0.05).在干预组中没有出现明显的组织学的结构改变.
[结论]VEGF和iNOS是缺氧性视网膜病变中血管生成的早期治疗靶点.AG不仅可以抑制iNOS,而且对VEGF也有部分抑制作用,且无明显的药物毒性,它抑制新生血管形成的效应至少与Bevacizumab是等效的,因此AG可以作为抑制新生血管形成的药物.
缺氧性病变;诱导因子;视网膜病变;血管内皮生长因子;多靶点药物
上海交通大学
博士
眼科学
王玲;王康孙
2007
中文
R774.103
74
2007-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）