深低温全眼球活性保存角膜的实验研究
研究背景：角膜深低温保存技术是Capella等于1965年创立的单纯角膜组织保存方法。该方法可使角膜内皮细胞长期处于“休眠状态”，保存期间内皮细胞活性不随时间延长而减弱。4℃湿房保存是一种简便的全眼球保存方法，它不易污染，便于运送和取材，但角膜内皮细胞活性保存时间短。将两者优点结合起来，探索一种既简便经济，又确实有效的长期深低温全眼球活性保存角膜方法，以促进眼库保存技术的发展。
目的：探索全眼球深低温活性保存角膜的最佳模式，研究影响深低温全眼球保存法的角膜内皮细胞活性的因素。
方法：根据深低温冷冻保存过程中前房内注入二甲基亚砜(DMSO)的方式，降温速率及复温条件的不同，将80只成年纯种新西兰兔眼球随机分为8组，冷冻保存时间30天。另取10只新鲜兔眼做对照。通过角膜内皮细胞活性染色方法评定各组角膜内皮细胞存活率(ESR)及光镜下内皮细胞形态，优选出最佳保存方法。将优选组角膜与对照组同时进行电镜检查及琥珀酸脱氢酶(SDH)组织细胞化学染色，对比观察两组细胞的超微结构及酶活性。
结果：评定出角膜内皮细胞存活率最高组，为最佳冻存组，其方法如下：抽空房水，注入7.5﹪(V/V)DMS0，4℃冰箱内冷平衡30min，其间每隔15min抽出前房内保护液后再次注入7.5﹪DMSO，共反复2次。再分段降温，-30℃30min，-80℃30min，最后将全眼球移入-196℃液氮中保存；40℃水浴中快速复温。该组角膜内皮细胞存活率平均为87.53﹪，与对照组(98.20﹪)比较，结果相近，符合临床穿透性角膜移植标准。最佳冻存组、对照组的SDH酶组织化学检测均呈阳性反应，最佳冻存组与对照组相比，颜色略浅，平均积分光密度值(IOD)分别为133.0±19.2和134.1±24.0，t=0.1，差异无统计学意义(P>0.05)。
结论：深低温全眼球活性保存角膜方法简便，保存的角膜内皮细胞活性较高，符合临床上穿透性角膜移植的标准。
低温保存;角膜内皮细胞;酶组织化学;全眼球保存法;角膜保存
大连医科大学
硕士
眼科学
蓝平
2007
中文
R779.65
37
2007-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）