根癌农杆菌介导的Pti4基因转化豇豆的研究
本研究以‘成豇七号’、‘广东金冠’、‘白沙十七’、‘摘不完白籽泰豆’、‘宏达雪豇豆’5个豇豆栽培品种为材料，探讨不同基因型、不同浓度生长调节剂对豇豆子叶节诱导不定芽和再生的影响，以豇豆子叶节为外植体，建立了豇豆再生体系。以‘成豇七号’为材料，通过农杆菌介导的子叶节侵染和子房原位转化两种方法，将番茄抗病转录因子Pti4基因导入豇豆，并对转化材料进行PCR检测，筛选出转化环节中各影响因子的最佳参数，为豇豆转化提供参考和技术支撑。主要研究结果如下: 1.研究了不同浓度6-BA对豇豆子叶节再生整个过程的影响，在豇豆种子萌发阶段，6-BA的添加有利于形成壮苗及促进后期不定芽的诱导，3.0mg/L为最佳浓度;诱导阶段的6-BA最佳浓度为1.0 mg/L，伸长阶段为0.5 mg/L，诱导的不定芽数为5.37个。 2.为解决不定芽的伸长问题，在诱导和伸长阶段添加KT，伸长效果显著，最佳浓度为0.06mg/L，和对照相比，在不定芽诱导数和芽长上都有所增加，平均芽数为5.97个，培养4周后的平均芽长为2.62cm。 3.实验同时比较了TDZ前处理的影响，无菌苗阶段添加0.01mg/L TDZ能够达到最佳诱导效果，诱导的不定芽数为5.56个。 4.豇豆不定芽在不添加任何激素的培养基上和添加0.5mg/L IBA的培养基上都能较好的生根，生根率都能达100％，IBA的添加使生根的启动时间由7.5d缩短为6.3d。 5.5种基因型的豇豆子叶节不定芽诱导率存在差异，‘成豇七号’、‘广东金冠’优于其它三个品种，芽诱导率分别为95.45％和92.75％，诱导的芽数分别为5.40和5.91个。 6.在农杆菌侵染子叶节的方法中，分别探讨了Kan、Cef对豇豆子叶节再生的影响，TDZ和6-BA前处理、预培养时间、侵染时间、共培养时间及pH等对遗传转化体系建立的影响。确定豇豆子叶节对Kan的抗性浓度为110mg/L，子叶节从无菌苗上切下一周后转入筛选培养基，筛选3周为最佳筛选方式。Cef抑制农杆菌的最佳浓度为200 mg/L。在遗传转化体系建立过程中，TDZ前处理优于6-BA前处理，预培养时间为24h、侵染时间20min、共培养时间2d、侵染液pH为5.8时分别有利于抗性芽的诱导。 7.田间用子房原位转化法，选当天开的花，采用花柱全切的方式，以农杆菌菌液侵染子房切口，分别在当天三个时间段侵染，结果发现12点之前处理的花几乎全部脱落，下午3点到6点之间处理的花收获到种子。
豇豆;子叶节再生体系;抗病转录因子;农杆菌介导;子房原位法;基因转化
四川农业大学
硕士
蔬菜学
李焕秀
2014
中文
S643.4;Q943.2
60
2015-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）