糖化血红蛋白五种检测方法的评价
目的：糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，GHb)是糖尿病(diabetic mellitus，DM)患者的诊断、血糖监测和药物治疗效果确定的有效指标之一，临床上常用HbA1c的检测代替GHb。目前，检测HbA1c的方法很多，有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)、电泳法、亲和层析法、酶法和免疫法等。高效液相色谱法测定HbA1c具有准确性和重复性高的特点，是检测糖化血红蛋白的金标准。本论文将HPLC法和另外四种方法进行比较及分析，为临床医师及各实验室在选择不同方法检测糖化血红蛋白时提供参考。 方法：实验标本正常对照组65例，其中男33例，女32例，年龄40～57岁，体重指数18～24kg/m2为本院体检无糖尿病的健康者；糖尿病患者64例，其中男33例，女31例，年龄45～66岁，体重指数18～24kg/m2。每一份标本在同样条件下用五种方法检测 HbA1c，记录测定结果，用于对比分析；选择具有医学决定水平的正常和异常浓度的样本，分别采用5个样本，批内在同一天内重复20次；批间分别在7 d内进行10次测试。计算出批内和批间的均值、标准差和CV值。收集HbA1c为10.0％的糖尿病患者的抗凝血，用0.9％的生理盐水进行梯度稀释，从低浓度到高浓度做直线回归分析，观察其线性范围。将HbA1c为10.0%的全血标本用0.9％的生理盐水进行1/5、2/5、3/5、4/5、5/5浓度稀释，分别用五种方法检测其HbA1c浓度，然后分别在血标本中添加56 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L三酰甘油、3.4 mmol/L胆红素，并用低温冻融方法制备轻度（Hb＜1g/L）、中度（Hb1～4 g/L）以及严重溶血标本（Hb＞5g/L）分别进行测试。在各种干扰物不同浓度的影响下，如果 HbA1c的值上下浮动0.3%，则将视为受到干扰。对比五种方法测定HbA1c的标本量和测定时间，以及回归方程及相关系数。 结果：五种方法中除外硼酸亲和法，其他四种方法均符合要求；相对而言，HPLC法中D-10型全自动糖化血红蛋白分析仪的精密度更佳。五种方法在4.0%～14.2%范围内线性良好，实测值与理论值的相关系数(r)在0.971～0.996之间，其中HPLC法最好。当加入各种干扰因素时，结果显示HPLC法、酶法、胶乳凝集法测得的HbA1c值上下浮动<0.2%，可见性能稳定、不易受到各种干扰物的影响。电泳法受溶血影响非常大，硼酸亲合法中NycoCard Reader II多功能全定量特种蛋白仪对溶血标本显示浓度太低测不出数，脂血标本显示浓度太高测不出数。通过标本量、测定时间、CV、r等指标进行比较，得出电泳法所采用的样本量及测定时间均高于其他方法。酶法的r最接近1。 结论：HPLC法作为金标准，批内和批间精密度在所采用的五种方法中是最好的，其次为酶法和胶乳凝集法，而硼酸亲和法的重复性则相对较差，电泳法结果与实验人员扫描和对电泳的波峰判断有关，主观随意性较大，要求实验人员技术娴熟、经验丰富，否则结果差异较大。HPLC法与理论值的相关性最好，且线性范围最宽；硼酸亲合法的线性图稍成 S形，且浓度越高，偏差越大，可能与其测定结果为总的糖化血红蛋白（所有糖化的血红蛋白）有关。HPLC法、酶法和胶乳凝集法对这三种方法受干扰物影响较小，稳定性较高；电泳法受溶血影响非常大；硼酸亲合法受干扰物影响最明显。五种方法同时检测同一标本时，酶法与HPLC法的结果最接近。
糖化血红蛋白;糖尿病;检测方法
天津医科大学
硕士
基础医学
刘民
2015
中文
R446.1;R587.1
54
2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）