TNF-α-ERK途径在PNS预处理缓解SD大鼠炎性内脏痛中的作用
[目的]检测 PNS预处理 SD大鼠炎性内脏痛中 TNF-a与ERK1/2蛋白的表达变化，初步探讨PNS预处理缓解炎性内脏痛的机制。 [方法]用行为学方法及VPI评分检测乙酸致炎性内脏痛SD大鼠模型；组织学方法通过HE染色，免疫组化、WB及ELISA等方法检测脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表达以及 ERK1/2的磷酸化改变；通过PNS预处理干预后，比较炎性内脏痛的变化脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表达以及ERK1/2的磷酸化改变等。 [结果]1. VPI评分结果：腹腔注射乙酸后，NS预处理组大鼠在第1个15min VPI均数为79分，在第15-30min达到反应高峰，30min时VPI评分为124分，持续到第70min左右；PNS预处理组大鼠在第1个15min VPI均数为40分，在第20-35min达到反应高峰，VPI评分为118分，持续到第60min左右。两实验组相较，NS预处理组大鼠VPI评分较高，差异有统计学意义（P<0.05）。从第120min开始，两实验组大鼠的VPI评分无明显差异。2. HE染色结果：正常大鼠小肠平滑肌厚度50μm左右，注射乙酸后，大鼠小肠明显抽搐，平滑肌厚度变化明显，60min时最薄，为15±3.70μm。计数中性粒细胞，发现注射乙酸后其数目迅速增高，60min达峰值。PNS预处理组各亚组粒细胞计数与NS预处理组相比，无明显差异；3．TNF-α、IL-1β的表达变化：注射1％乙酸后，TNF-a的表达迅速增加，30min时即达到1200pg/ml，90min时达到峰值（1450±35pg/ml）。180min时仍有1000pg/ml以上。正常大鼠脊髓中几乎没有检测到IL-1β的表达，注射1%乙酸后，IL-1β的表达迅速增加，60min时达到峰值（15±1.32pg/ml）。180min时仍有1000pg/ml以上。与NS预处理组相比较，注射1%乙酸后，TNF-a的表达增幅减小，30min时为500pg/ml，90min时达到峰值（750±23pg/ml）。TNF-a的浓度各时间点均小于NS预处理组。PNS预处理后用ELISA法检测炎性内脏痛大鼠脊髓IL-1β的浓度变化。与NS与处理组相比较，注射1%乙酸后，IL-1β的表达增幅减小不明显，这与TNF-a表达不同。4．胸段脊髓背角 p-ERK1/2的表达：在脊髓前角和中央侧角，p-ERK1/2可见表达在胞体，在背角，清晰的神经元胞体不可见。腹腔注射乙酸后，NS预处理各亚组脊髓背角p-ERK1/2表达均高于正常组，30、60min组p-ERK1/2表达逐渐增高，90，180min亚组p-ERK1/2表达有所下调，60min组p-ERK1/2表达最高; PNS预处理组30min亚组 p-ERK1/2的表达略强于正常，但差异不显著，60、90、120min各亚组p-ERK1/2表达逐渐增加，120min时最高，180min时下调。且60、90min亚组p-ERK1/2表达明显低于相应时间点NS预处理组，差异有统计学意义。 [结论]PNS预处理缓解SD大鼠炎性内脏痛的机制可能与其调节TNF-a的表达，抑制ERK的磷酸化有关。
炎性内脏痛;三七总皂苷预处理;p-ERK1/2蛋白;肿瘤坏死因子α
南华大学
硕士
基础医学
万炜
2015
中文
R363
63
2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）