胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用
[目的]胞红蛋白（cytoglobin，CYGB）是一种新发现的携氧球蛋白，CYGB在神经细胞缺氧时表达明显增加并具有明显的细胞保护作用。本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中 CYGB表达模式；构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型，研究CYGB在氧化应激过程中对巨噬细胞的作用。 [方法]1、将小鼠巨噬细胞株 RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、EC及人肝癌细胞HepG2扩增后，Western blot检测正常生理状态下RAW264.7、THP-1、EC及HepG2细胞中CYGB蛋白的表达水平。2、将小鼠巨噬细胞株RAW264.7扩增后，Western blot检测RAW264.7在H2O2刺激不同时间时CYGB的蛋白表达水平：分为4组:对照组，0.5mmol/L H2O2处理6、12、24 h组。Western blot检测RAW264.7在不同浓度H2O2刺激12h时CYGB蛋白的表达水平：分为4组：对照组，0.25mmol/L H2O2、0.5mmol/L H2O2、1mmol/L H2O2处理组。3、首先构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型。然后观察在氧化应激过程中 CYGB对 RAW264.7小鼠巨噬细胞的作用，将RAW264.7细胞分为4组：对照组、0.5mmol/L H2O2处理组、0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组。于12h后，检测 CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、乳酸脱氢（LDH）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）；荧光定量 PCR检测 CYGB、NF-κB在细胞中的表达。 [结果]1、Western blot结果显示：在正常生理状态下，CYGB在小鼠巨噬细胞株RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、人脐静脉内皮细胞EC及人肝癌细胞HepG2中均有表达。2、Western blot结果显示：H2O2处理6、12、24 h组CYGB表达水平高于对照组，并且在12h组CYGB表达水平最高，差异有统计学意义（P<0.05）。0.25mmol/L H2O2、0.5mmol/L H2O2和1mmol/L H2O2处理巨噬细胞12h后CYGB表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。3、荧光显微镜结果显示：转染CYGB过表达质粒及 CYGB低表达质粒的巨噬细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光。4、Western blot结果显示：0.5mmol/L H2O2处理组、0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组的CYGB表达最高（P<0.05），0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组的CYGB表达较0.5mmol/L H2O2处理组低，差异有统计学意义（P<0.05）。酶联免疫吸附测定法（ELISA）和ROS检测结果显示：与0.5mmol/L H2O2相比，0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组中GSH-PX、SOD升高，LDH、MDA、ROS下降；与0.5mmol/L H2O2组相比，0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组中GSH-PX、SOD下降，LDH、MDA、ROS升高。荧光定量PCR检测显示：与正常对照组比较，H2O2处理组CYGB和NF-κB表达均上调（P<0.05）。与 H2O2对照组比较，CYGB过表达组CYGB表达较高，NF-κB表达较低（P<0.05）；CYGB低表达组CYGB表达较低，NF-κB表达较高（P<0.05）。 [结论]1.CYGB在巨噬细胞中表达，在 H2O2刺激时表达水平增加。2.CYGB在巨噬细胞氧化应激损伤过程中具有细胞保护作用。
巨噬细胞;氧化应激;胞红蛋白;保护作用
南华大学
硕士
基础医学
屈顺林
2015
中文
R363
89
2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）