PLK1 shRNA干扰对鼻咽癌CNE2细胞生长和侵袭的影响
[目的]Polo样激酶1(polo-like kinase1，PLK1)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，因在细胞周期中起重要作用而受到广泛关注。我们前期实验发现EBV转化淋巴母细胞中PLK1表达上调。大量研究表明PLK1在人类多数肿瘤中高表达，下调PLK1的表达可显著抑制肿瘤细胞的生长。本实验通过体外细胞实验，研究PLK1表达下调后对鼻咽癌细胞生长及侵袭等生物学行为的影响，阐明PLK1在肿瘤发生中的作用，为鼻咽癌(NPC)的靶向治疗提供理论依据。 [方法]构建针对 PLK1基因的干扰质粒 pGPU6/GFP/Neo-shPLK1及空质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC，通过lipo fectamineTM2000脂质体分别转染鼻咽癌细胞系（CNE2），G418筛选稳定转染细胞系，荧光显微镜观察细胞内绿色荧光表达情况，qRT-PCR、Western Blot分别检测转染前后PLK1基因的mRNA及蛋白在各组细胞中的表达情况。采用 CCK-8、细胞划痕、流式细胞术分析、平板克隆形成及细胞迁移侵袭等实验，观察PLK1表达改变对CNE2细胞增殖和侵袭等生物学行为的影响。 [结果]1.成功建立PLK1稳定低表达的CNE2细胞系。 荧光显微镜观察显示转染组携带绿色荧光的细胞数达到90％；测序结果经 PubMed在线 BLAST比对显示,目的基因的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-shPLK1吻合率达100%,证明载体构建成功；qRT-PCR、Western Blot检测发现转染pGPU6/GFP/Neo-shPLK1质粒的细胞（实验组）较转染pGPU6/GFP/Neo-shNC（阴性对照组）和普通CNE2细胞（空白组）相比，PLK1基因的mRNA转录及蛋白表达水平均明显降低，表明成功建立PLK1稳定低表达的CNE2细胞系。 2.沉默PLK1表达可抑制CNE2细胞的增殖及侵袭能力。 CCK8及平板克隆实验结果显示：实验组CNE2/shPLK1较阴性对照组CNE2/shNC及空白组CNE2相比，生长速度及克隆形成率均降低，且差异具有统计学意义（P<0.05），表明PLK1表达下调能抑制CNE2细胞的增殖。 流式细胞仪检测显示：转染 PLK1低表达质粒的细胞 CNE2/shPLK1较阴性对照组CNE2/shNC及空白组CNE2相比，G2期细胞百分比明显升高，S期细胞百分比明显降低，且凋亡细胞百分比升高，表明PLK1表达下调能导致CNE2细胞发生G2期阻滞，诱导细胞凋亡。 划痕实验、迁移及侵袭实验结果显示：转染PLK1低表达质粒的细胞CNE2/shPLK1较阴性对照组CNE2/shNC及空白组CNE2相比，迁移及侵袭能力均降低，且差异具有统计学意义（P<0.05），表明 PLK1表达下调能降低CNE2细胞的侵袭能力。 [结论] PLK1表达下调可抑制CNE2细胞的生长、增殖及侵袭能力。
鼻咽癌;Polo样激酶1;靶向治疗;细胞侵袭
南华大学
硕士
基础医学
唐运莲
2015
中文
R739.63
76
2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）