荔枝结合态过氧化物酶分离纯化及其性质的初步研究
褐变导致荔枝采后品质劣变很快，过氧化物酶（POD）是参与荔枝采后褐变的关键酶之一。前人已研究了采后褐变过程中可溶性过氧化物酶（SPOD）活性的变化。本试验以成熟‘乌叶’荔枝为材料，首次测定了荔枝采后结合态过氧化物酶（BPOD）活性变化；探索了荔枝果皮BPOD的分离纯化体系；应用建立的体系，对荔枝果皮BPOD进行了初步分离纯化；并对分离纯化得到的BPOD第一组分进行酶学性质的初步研究。主要的结果如下： 对与荔枝褐变相关的生理指标进行测定，4℃与25℃贮藏期间，随着贮藏时间的延长，果皮的褐变指数上升，但果肉可溶性固形物含量（TSS）几乎没有变化，均为16％左右。4℃贮藏，可溶性POD，结合态POD活性均是先上升后下降，同工酶谱条带强弱变化与活性变化一致，但并未出现新的条带也无原条带的消失。25℃贮藏条件下，伴随果实的褐变进程，结合态POD活性迅速上升；同工酶电泳结果显示，结合态POD部分组分的活性显著增加。 通过对荔枝果皮匀浆，弃滤液(可溶态 POD粗酶液)，反复悬浮滤渣，再加入含甘油，去垢剂Triton X-100的盐溶液从荔枝果皮中提取出BPOD粗酶液，并摸索了其在不同层析介质上的分离特性，由此建立了荔枝 BPOD的分离纯化体系：将BPOD粗酶液过Streamline Phenyl柱进行粗分离，再过阳离子交换柱CM-52，疏水作用层析Phenyl Sepharose HP，凝胶过滤层析Superdex200，得到BPOD的四个组分。 对纯化后的第一组分进行酶学性质的初步研究，其最适 pH为6.5，最适温度为40℃。在H2O2存在下，对各种底物表现出的活性强弱为：愈创木酚＞4-甲基邻苯二酚＞肉桂醇＞绿原酸＞芥子醇＞邻苯二酚＞抗坏血酸＞没食子酸＞表儿茶素＞对苯二酚＞焦性没食子酸；与间苯二酚、苄醇、松柏醇、4-甲氧基酚均无反应。对H2O2、愈创木酚、4-甲基邻苯二酚、肉桂醇、芥子醇的米氏常数分别为16.3mM、26.9mM、4.5mM、30.1 mM、23.7 mM。DTT、ASA、L-半甘氨酸、Cu2+抑制其活性，Ca2+不影响其活性，Mn2+激活其活性，0.1mM EDTA对其活性无影响，1mM EDTA抑制其活性，0.01% TritonX-100激活其活性，0.05%TritonX-100轻微抑制其活性。
荔枝果皮;过氧化物酶;分离纯化;生理指标;褐变指数
福建农林大学
硕士
园艺学
郭志雄;潘东明
2015
中文
S667.1;S601
79
2016-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）