ERK1/2信号通路在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡过程中的作用
目的：探讨不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人正常肝细胞（L-02）细胞生长和凋亡的影响，并研究细胞外信号调节激酶（extracellular-signal-regulated kinase，ERK)信号通路在 NaAsO2诱导 L-02细胞凋亡中的作用，为探讨 ERK1/2信号传导通路在砷致肝损伤机制中的作用提供实验依据。 方法：1、不同浓度（0、50、100、150μmol/L）NaAsO2作用L-02肝细胞24h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 L-02肝细胞存活率；流式细胞术检测 L-02肝细胞细胞凋亡率；免疫印迹（WB）技术检测L-02肝细胞中ERK1/2、p-ERK1/2和BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白表达水平的差异。2、ERK1/2特异性抑制剂（PD98059）预处理L-02肝细胞30min后，再用不同浓度NaAsO2作用L-02肝细胞24h后，MTT法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡率，WB检测ERK1/2、p-ERK1/2和BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白的表达情况。 结果： 1、NaAsO2对 L-02肝细胞生长和凋亡的影响：L-02肝细胞的存活率随 NaAsO2浓度的增加而降低，差异具有统计学意义（p<0.05）；L-02肝细胞凋亡率随NaAsO2浓度的增加而升高，差异具有统计学意义（P<0.05）； 2、NaAsO2对L-02肝细胞中ERK1/2、ERK1/2磷酸化水平的影响：ERK1、ERK2蛋白的表达随NaAsO2浓度的增加而升高，100、150μmol/L NaAsO2组的表达明显增强，差异具有统计学意义(P<0.05)；ERK1、ERK2磷酸化水平随 NaAsO2浓度的增加而表达升高，100、150μmol/L NaAsO2组表达显著增强，差异具有统计学意义(P<0.05)； 3、NaAsO2对L-02肝细胞中BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白表达的影响：BaX蛋白的表达随NaAsO2浓度的增加而升高，150μmol/L NaAsO2组表达最强，差异具有统计学意义(P<0.05)；Bcl-2蛋白的表达随NaAsO2浓度的增加而降低，150μmol/L NaAsO2组表达明显减弱，差异具有统计学意义(P<0.05)；BaX/Bcl-2比值随剂量的增加而升高，差异具有统计学意义(P<0.05)；Cyto-c、Caspase-3蛋白的表达随NaAsO2剂量的增加而升高，100、150μmol/L NaAsO2组表达最强，差异具有统计学意义(P<0.05)。 4、ERK1/2抑制剂PD98059对NaAsO2所致L-02肝细胞的影响：ERK1/2抑制剂可降低NaAsO2对L-02肝细胞的生长抑制作用，细胞存活率较拮抗前升高，差异具有统计学意义(P<0.05)；细胞凋亡率较拮抗前降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；ERK1、ERK2蛋白的表达较拮抗前升高，差异没有统计学意义；ERK1、ERK2磷酸化水平的表达较拮抗前下降，100μmol/L NaAsO2组的ERK1磷酸化水平表达明显减弱，差异具有统计学意义(P<0.05)，150μmol/L NaAsO2组的ERK2磷酸化水平表达明显减弱，差异具有统计学意义(P<0.05)；BaX、Bcl-2蛋白的表达较拮抗前明显升高，差异具有统计学意义(P<0.05)，但BaX/Bcl-2比值较拮抗前降低，150μmol/L NaAsO2组明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；Cyto-c、Caspase-3蛋白的表达较拮抗前下降，150μmol/L NaAsO2组表达明显减弱，差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1. NaAsO2可抑制 L-02肝细胞的生长，诱导细胞凋亡的发生；NaAsO2诱导 L-02肝细胞凋亡的作用机制可能与改变ERK1/2蛋白的表达，增强磷酸化ERK1/2蛋白表达水平，继而改变BaX、Bcl-2、Cyto-c和Caspase-3等相关蛋白的表达有关。 2. NaAsO2抑制L-02肝细胞的生长和诱导凋亡的发生可被ERK1/2抑制剂PD98059阻断；而ERK1/2抑制剂的应用为砷中毒肝损伤的防治提供一种思路。 3.ERK1/2信号通路在不同浓度NaAsO2引起L-02肝细胞生长与凋亡变化过程中发挥重要作用，NaAsO2对肝损伤的作用机制可能与ERK1/2信号通路作用有关。
亚砷酸钠;细胞凋亡;肝损伤;蛋白表达;作用机制
贵阳医学院
硕士
卫生毒理学
罗鹏
2012
中文
R657.3
49
2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）