Cocktail探针药物法评价头花蓼对肝CYP450的影响
目的：建立“Cocktail”探针药物法测定细胞色素P450(cytochrome P450，CYP450)不同亚型酶活性的方法，并通过体外（人肝微粒体）和体内（SD大鼠）模型，研究头花蓼对CYP2C9、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4和CYP1A2活性的影响，为临床合理用药提供依据。 方法：体外试验中，采用非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、奥美拉唑、睾酮/咪达唑仑分别作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1、CYP2C19和CYP3A4的探针药物，建立同时测定人肝微粒体孵育液中各探针药物代谢产物（乙酰氨基酚、羟基甲苯磺丁脲、6-羟基氯唑沙宗、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮和α-羟基咪达唑仑）的超高液相色谱–串联质谱（UPLC-MS/MS）分析方法。考察人肝微粒体最佳孵育时间和蛋白浓度后，分别将不同浓度的特异性探针抑制剂与混合探针药物（非那西丁、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、睾酮和咪达唑仑的浓度分别为50、50、50、100、100和25μmol/L）在人肝微粒体中共同孵育，验证“Cocktail”探针底物法的可行性。然后将不同浓度头花蓼提取物(25~1000μg/mL)与“Cocktail”探针药物在人肝微粒体中共同孵育，根据探针药物代谢物的产生量，用GraphPad Prism5.0软件计算IC50值，考察头花蓼对人肝微粒体的抑制作用。体内试验中，采用咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、奥美拉唑、咪达唑仑分别作为CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1、CYP2C19和CYP3A4的探针药物，建立同时测定大鼠血浆中各探针药物原型的UPLC-MS分析方法。将大鼠随机分成7组，分别为诱导剂组（苯巴比妥）、抑制剂组（酮康唑）、空白对照组、7d-low（头花蓼7天低剂量组）、7d-high（头花蓼7天高剂量组）、14d-low（头花蓼14天低剂量组）、14d-high（头花蓼14天高剂量组）。分别于给药结束后的第二天静注五种Cocktail探针药物，考察各组大鼠体内五种探针药物血药浓度动态变化规律，利用DAS2.0软件进行动力学参数拟合，通过SPSS18.0统计软件分析比较各组主要药动学参数的差异。 结果：建立的体内体外生物样品中各指标成分的分析方法均符合相关技术要求。体外实验人肝微粒体的最佳孵育时间为60 min，最佳蛋白浓度为0.5 mg/mL。建立的“Cocktail”探针底物法可用于 CYP450酶抑制性研究，选用的特异性抑制剂对CYP450的IC50为0.42-11.43μmol/L。头花蓼对5个亚型酶的IC50值为849.6-2287μg/mL。体内实验，诱导剂（苯巴比妥）可以显著诱导 CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9，抑制剂（酮康唑）可以显著抑制CYP3A4，表明“Cocktail探针药物法”模型成功，可用于研究头花蓼对CYP450的影响作用。咪达唑仑检测指标下，7d-high组的AUC(0-t)和Vz与空白对照组比较，有统计学差异；14d-high组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、CLz和Vz与空白对照组比较，有统计学差异。甲苯磺丁脲检测指标下，7d-low组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、t1/2z，7d-high组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、MRT(0-∞)、t1/2z，14d-low组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)，14d-high组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)和t1/2z与空白对照组比较，有统计学差异。其余氯唑沙宗、咖啡因和奥美拉唑检测指标下，各药动学参数与空白对照组比较，无有统计学差异。提示：头花蓼可诱导CYP3A4和CYP2C9。 结论：建立的分析方法快速、准确、灵敏，可用于体内和体外“Cocktail”探针药物评价主要CYP450亚型酶的活性。临床剂量下，头花蓼对人主要5种CYP450无抑制作用；可诱导大鼠CYP3A4和CYP2C9。提示头花蓼相关制剂与临床常用药物联用时（尤其为CYP3A4和CYP2C9底物），应当调整剂量。此外，该研究建立的体内外方法，为中药合理使用以及中药-西药的药物相互作用研究提供理论依据和参考。
头花蓼;探针药物法;细胞色素P450;临床合理用药
贵阳医学院
硕士
药剂学
王永林;李勇军;黄勇
2014
中文
R285.5
69
2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）