雷帕霉素增强CML耐药细胞对尼洛替尼敏感性的研究
目的：体外建立对尼洛替尼(nilotinib，AMN107)耐药的慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562-RN，并探讨雷帕霉素(rapamycin，RAPA)增强K562-RN细胞对AMN107敏感性的研究。 方法：以AMN107浓度递增的方法诱导人白血病细胞株K562，使其建立耐药细胞株（K562-RN）,MTT法确定其耐药倍数。采用 RAPA与 AMN107联用或单独处理K562-RN细胞，MTT增殖抑制实验观察对K562-RN细胞生长抑制的影响，AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测MDR1、mTOR、HO-1、BCL-2和Caspase-3 mRNA的表达及Western blot分析BCR-ABL、P-GP、mTOR、HO-1、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达。RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因的拷贝数。 结果：成功建立了针对 AMN107耐药的人白血病细胞株 K562-RN；其耐药倍数为K562细胞的2.01倍。200或100nmol/L RAPA与不同浓度的AMN107结合不同程度的增强 K562-RN对 AMN107的敏感性；流式细胞术结果显示：对照组(K562-RN),200nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,100nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,20μmol/L AMN107组,200nmol/L RAPA组及100nmol/L RAPA组的细胞凋亡率分别为7.77％、57.04%、55.37%、19.39%、33.23%和12.81%。200或100nmol/L RAPA联合应用AMN107降低MDR1，mTOR，HO-1，BCL-2 mRNA表达以及降低BCR-ABL，P-GP，mTOR，HO-1，BCL-2蛋白水平的表达，同时增加Caspase-3 mRNA以及蛋白水平的表达，差异具有统计学意义(p<0.05)。RQ-PCR法检测结果显示对照组(K562-RN),200nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,100nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,20μmol/L AMN107组,200nmol/L RAPA组及100nmol/L RAPA组的BCR-ABL融合基因拷贝数分别为(1.53×109±0.06)、(2.16×108±0.04)、(4.36×108±0.03)、(9.67×108±0.09)、(6.48×108±0.07)及(1.42×109±0.05)，差异有统计学意义(p<0.05)。 结论：成功建立了对AMN107耐药的人白血病细胞株K562-RN,并一定浓度剂量的RAPA能显著性增强K562-RN细胞对AMN107的敏感性。
雷帕霉素;尼洛替尼;K562-RN细胞;慢性粒细胞白血病;细胞凋亡
贵阳医学院
硕士
药剂学
方琴;王永林
2013
中文
R973;R733.72
80
2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）