他莫昔芬对乳腺癌细胞周期蛋白E的影响及其信号机制研究
研究背景及目的：在乳腺癌肿瘤细胞和组织中，可观察到野生型周期蛋白 E（CCNE）表达上调，同时伴随大量低分子量周期蛋白E（LMW-CCNE）的生成。LMW-CCNE表达水平可预示乳腺癌患者临床预后不良和对抗雌激素治疗。他莫昔芬（TAM）长时间用于乳腺癌治疗可引起药物耐受及乳腺癌复发和转移,但其机制尚未明了。本研究旨在探讨4-羟基他莫昔芬(OHT，TAM的活性形式）对乳腺癌细胞CCNE蛋白剪切、细胞迁移的影响及其信号机制。 方法：采用雌激素受体（ER）阳性/G蛋白偶联受体30（GPR30）阳性乳腺肿瘤细胞MCF-7和ER阴性/GPR30阳性细胞SK-BR-3为模型系统，以ER阴性/GPR30阴性细胞MDA-MB-231作为对照。常规细胞培养，以OHT刺激模型细胞，通过蛋白印迹法观察蛋白质分子量变化，细胞划痕法观察细胞迁移变化；采用GPR30抑制剂G15或表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂（EI）预处理模型细胞，或siRNA转染沉默靶基因表达，观察这些因素对OHT诱导CCNE蛋白剪切和细胞迁移的影响。 结果：(1)雌激素（E2）可诱导乳腺癌MCF-7细胞CCNE剪切及细胞迁移，但OHT不能阻断E2诱导的上述效应，提示E2诱导的效应可能为非雌激素受体α（estrogen receptorα）依赖性。(2)采用OHT单独处理MCF-7或SK-BR-3细胞，可观察到类似于E2引起的CCNE蛋白剪切效应，而OHT对MDA-MB-231细胞CCNE无明显影响。以不同浓度的OHT（1~20μM）处理培养MCF-7和SK-BR-3细胞，发现1μM OHT即可诱导CCNE的蛋白剪切反应，呈量效依赖关系；时效观察显示，OHT在作用1h即可诱导明显效应，可持续~24 h。结果提示，OHT诱导的上述效应可能与GPR30有关，其特点为快速而持续。(3) GPR30特异性抑制剂G15（1μM）或siRNA沉默GPR30表达可显著抑制或消除OHT诱导MCF-7细胞CCNE蛋白剪切；G15明显抑制OHT诱导的细胞迁移，提示OHT诱导的MCF-7细胞反应可能是通过 GPR30实现的。(4) EGF刺激可诱导类似OHT引起的CCNE反应，而细胞外信号激活蛋白激酶（ERK）磷酸化活化的抑制剂U0126或EGFR的抑制剂均可显著抑制或消除OHT诱导细胞CCNE蛋白剪切。 结论:（1）OHT诱导MCF-7乳腺癌细胞CCNE的蛋白剪切，同时促进细胞迁移（2）OHT通过 GPR30-EGFR-ERK信号通路诱导 CCNE蛋白剪切和细胞迁移;（3）GPR30介导的CCNE蛋白剪切和细胞迁移增强可能是OHT抗性产生的分子机制之一。
他莫昔芬;周期蛋白E;G蛋白偶联受体30;乳腺癌;细胞迁移;信号机制
贵阳医学院
硕士
药理学
王旭东;宛蕾
2013
中文
R737.9;R966
54
2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）