拟南芥CyclinH蛋白的原核表达纯化及特征性分析
细胞周期蛋白H(Cyclin H)属于庞大的细胞周期蛋白家族，参与细胞周期循环的各个时相。除了在高等植物中，哺乳动物细胞周期蛋白H的生物学功能和其重要性早已是研究的热点。本工作致力于通过原核表达系统获得高纯度和高产量的拟南芥CyclinH蛋白，并检测和分析其生物物理学特性。我们在拟南芥CyclinH蛋白的N-末端部分构建入了His-标签，通过一步Ni-NTA亲和纯化获得高纯度的蛋白。蛋白亲和层析实验表明，溶液中拟南芥CyclinH蛋白表现为单体状态。圆二色谱实验结果表明拟南芥CyclinH蛋白是螺旋结构蛋白并含有较高含量的无规则卷曲结构。蛋白热稳定性实验表明拟南芥CyclinH蛋白的耐热性较差，在室温下容易降解，属于不稳定蛋白。拟南芥CyclinH蛋白的柔性和不稳定性可能是其内在特性，这与拟南芥CyclinH蛋白在细胞周期循环过程中结合不同的蛋白发挥作用有关，其迅速地降解可能是为了适应时相的转变。进一步实验发现，SO42-、PO43-和重金属离子Pt2+对于拟南芥CyclinH蛋白的稳定性具有显著影响，实验表明高浓度的SO42-、PO43-离子能够有效地增加蛋白的热稳定性并防止其降解。重金属Pt2+离子和SO42-离子能够保护拟南芥CyclinH蛋白，减缓其被糜蛋白酶的酶切。本实验为拟南芥CyclinH体外表达和纯化提供了可靠地实验依据，并对其蛋白存在状态、稳定性、结构特性进行了初步探索研究。SO42-、PO43-和Pt2+等离子的准确适量使用也许就是我们进一步探索拟南芥CyclinH结晶的重点。
周期蛋白H;蛋白纯化;热稳定性;圆二色谱
浙江农林大学
硕士
生物物理学
徐英武
2015
中文
Q943.2
68
2016-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）