竹荪多糖的图谱分析及对砷致肝损伤的干预作用机制研究
目的： 1.竹荪多糖图谱分析：定性和定量分析竹荪子实体及菌托多糖中所含单糖种类与含量以及此两种多糖血清图谱； 2.竹荪多糖对NaAsO2染毒L-02肝细胞干预作用：利用基因芯片技术从基因水平研究不同浓度NaAsO2和竹荪多糖对 L-02肝细胞全基因表达谱的影响； 3.竹荪多糖对砷致肝损伤干预作用：观察IKBKG、DUSP6在砷中毒大鼠及竹荪多糖干预后肝组织中的表达情况。为竹荪多糖的生物利用和干预砷致肝损伤的作用机制研究提供实验依据。 方法： 1.采用水提醇沉法分别提取竹荪子实体及菌托中的多糖，PMP衍生化后采用高效液相色谱法分析其单糖的组成和含量；分别用100mg/kg的竹荪子实体多糖和竹荪菌托多糖对大鼠灌胃，收集灌胃1h后的血清，三氯乙酸沉淀后测定此两种多糖在大鼠的血清图谱； 2.应用Affymetrix PrimeView全人类基因表达谱芯片，筛选不同剂量 NaAsO2（50、100、150μmol/L）组和竹荪多糖（1.6、8、40mg/L）干预NaAsO2染毒L-02肝细胞后差异倍数大于等于5的差异表达基因。3.RT-PCR和免疫组化分析法分别检测正常组、不同剂量 NaAsO2(25、50、100mg/kg)组及竹荪多糖(25、50、100mg/kgl)干预NaAsO2染毒大鼠后肝脏中IKBKG和DUSP6基因 mRNA相对表达和蛋白表达情况。 结果： 1.高效液相色谱法检测结果：竹荪子实体和菌托多糖所含单糖分别是：D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖，摩尔比分别是：1.53：52.30：2.78：1.00：1.78；D-甘露糖、核糖、L-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖，13.07：1.00：1.08：1.28：189.62：62.74：8.55：31.85；竹荪子实体及菌托的血清样品中可检测到多糖代谢物且此两种多糖体内代谢物的出峰时间与单糖标准品一致。 2.基因芯片实验结果：与对照组比较，与染砷有关的共筛选出281个表达有差异的基因，表达上调者74个，表达下调者107个；随着染砷剂量的增高而新增的表达差异基因有346个，其中上调的有113个，下调的有91个；与竹荪多糖相关的差异基因有234个，其中上调基因有6个，下调基因有150个；与100μmol/LNaAsO2组相比，随着竹荪多糖剂量的增高而新增的干预砷中毒的表达差异基因有364个，其中上调107个，下调118个。 3.NaAsO2与竹荪多糖对大鼠肝组织中IKBKG、DUSP6mRNA表达水平的影响：与正常对照组相比，IKBKG mRNA相对表达量随染砷剂量的增高有增高的趋势，50mg/kg、100mg/kgNaAsO2组差异较明显，差异有统计学意义;DUSP6 mRNA相对表达量则随染砷剂量的增高而有增高的趋势，各染砷组的差异有统计学意义；与100mg/kgNaAsO2组相比，不同浓度竹荪多糖进行干预后，IKBKG mRNA相对表达量随竹荪多糖剂量的增高有降低的趋势，其中50mg/kgl、10mg/kg竹荪多糖干预组的差异有统计学意义；DUSP6 mRNA相对表达量随竹荪多糖剂量的增加有降低的趋势，其中25mg/kg、100mg/kgl竹荪多糖干预组的差异有统计学意义；与中砷组比，竹荪单独作用组的IKBKG mRNA、DUSP6 mRNA相对表达量差异有统计学意义。 4.NaAsO2与竹荪多糖对大鼠肝组织中IKBKG、DUSP6蛋白表达水平的影响：与正常对照组相比，IKBKG、DUSP6蛋白在不同浓度NaAsO2组中均有表达，差异有统计学意义，且随NaAsO2浓度的增高而增高；加竹荪多糖干预后，与50mg/kgNaAsO2组相比，各竹荪多糖组大鼠肝脏中IKBKG、DUSP6蛋白的表达有随竹荪多糖的增加有下降的趋势。 结论： 1.竹荪菌托所含竹荪多糖的单糖种类和含量较竹荪子实体多，竹荪多糖经胃肠道进入大鼠体内后主要分解为单糖； 2.基因芯片结果提示竹荪多糖对砷所致肝损伤的干预作用机制可能与抗炎作用、提高免疫反应、调控代谢等方面有关； 3.NaAsO2致肝损伤机制可能与 IKBKG、DUSP6 mRNA相对表达量和蛋白表达的上调有关，加竹荪多糖进行干预后可改善NaAsO2对肝脏的损伤作用。
竹荪多糖;高液相色谱;基因芯片;亚砷酸钠;肝损伤
贵阳医学院
硕士
卫生毒理学
罗鹏
2015
中文
R114
69
2016-01-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）