再生障碍性贫血患者PIG-A基因突变和IL-3、IL-8变化的研究
目的：①研究再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）患者PIG-A基因的突变及与AA发病的关系。②检测AA患者外周血白细胞上糖基磷脂酰肌醇锚蛋白的表达，初步探讨PIG-A基因突变与CD55、CD59的表达变化的关系。③检测AA患者血浆IL-3、IL-8水平的变化，探讨免疫调节因素在AA发病中的作用。 方法：流式细胞术检测 AA患者白细胞上 CD55、CD59的表达；饱和酚抽提法提取基因组DNA，PCR扩增AA患者PIG-A基因外显子（exon）2，exon4，exon5，过柱法纯化PCR产物，并将纯化的PCR产物送检测序；定量酶免疫法测定对照组和实验组血浆中IL-3、IL-8的水平。 结果：①30例AA患者中有14例患者发生了PIG-A基因的突变，共发现43个突变位点，其中11例患者基因突变主要发生在exon2上，exon4及exon5上出现突变的患者各有5例。②AA患者PIG-A基因突变类型主要是单碱基的替代，43个突变位点中，除碱基插入、碱基缺失各2个外，其余均为碱基替代，占总突变的90.70％。其中腺嘌呤（A）与鸟嘌呤（G）之间的碱基替代发生频率最高，达23.26%；胞嘧啶（C）与 G之间的碱基替代发生频率最低，仅为2.33%。C与胸腺嘧啶（T）之间碱基替代有87.5%为错义突变；C与G之间的碱基替代为同义突变。43个突变位点共引起28个氨基酸的改变。③AA患者白细胞CD55表达率（89.56%±9.23%）与正常对照（97.68%±1.52%）相比显著性降低（P﹤0.05）。AA患者 CD59的表达率（90.44%±11.75%）与正常对照（97.77%±1.59%）相比无显著性差异（P﹥0.05）。④AA患者血浆中IL-3（28.33 ug/ml±8.34 ug/ml）水平与正常对照组（32.39 ug/ml±7.15 ug/ml）相比无明显差异(P﹥0.05)。AA患者血浆IL-8（40.63 ug/ml±27.10 ug/ml）水平与正常对照（23.25 ug/ml±5.67 ug/ml）相比明显升高，差别具有统计学意义（P﹤0.05）。无PIG-A基因突变组血浆IL-8（60.02 ug/ml±22.94 ug/ml）水平明显高于PIG-A基因突变组（19.07 ug/ml±6.77 ug/ml）（P﹤0.01）。 结论：①30例AA患者中有14例发生PIG-A基因的突变（突变率为46.67％），提示PIG-A基因的突变与AA的发病有一定联系。②AA患者PIG-A基因突变位点主要集中于exon2上。突变类型以碱基替代为主（90.70%），腺嘌呤与鸟嘌呤之间的碱基替代发生频率最高， exon5上发生错义突变的频率最高。③AA患者外周血白细胞表面锚蛋白 CD55的表达明显低于正常对照，差别具有显著性；AA患者外周血白细胞表面锚蛋白CD59的表达与正常对照相比无显著性差异。④AA患者血浆IL-8水平明显增高，无PIG-A基因突变组患者血浆IL-8水平明显高于PIG-A突变组。
再生障碍性贫血;糖基磷脂酰肌醇锚蛋白;白细胞介素;基因突变;发病机制
蚌埠医学院
硕士
临床检验诊断学
吴俊英;李玉云
2008
中文
R556.5
53
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）