MCP-1/PI3K/Akt信号通路参与骨癌痛调控及机制
第一部分：MCP-1通过PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞 目的:观察MCP-1在体外通过细胞内PI3K/Akt信号通路对大鼠小胶质细胞的激活作用。 方法:将体外培养的大鼠小胶质细胞分为六组：空白对照组（I组）、MCP-11min组（II组）、MCP-110min组（III组）、MCP-120min组（IV组）、MCP-130min组（V组）、MCP-1+LY294002组（VI组）。收集细胞，通过免疫组化（n=4）、免疫荧光（n=4）、Western blots（n=4）的方法检测每组细胞p-Akt和OX-42的表达变化。 结果:免疫组化结果显示：与其他组比较，II、III组小胶质细胞p-Akt的MOD值显著增加(P<0.01)；II组p-Akt的MOD值与III组差异无统计学意义(P>0.05)；I、IV、V、VI各组之间p-Akt表达无统计学差异(P>0.05)。免疫荧光和Western Blots结果显示：与I组相比，III组小胶质细胞p-Akt和OX-42表达显著增加(P<0.05)；VI组与III组相比p-Akt和OX-42表达显著降低(P<0.05)。 结论: MCP-1可能通过激活PI3K/Akt信号通路活化体外大鼠小胶质细胞。 第二部分：MCP-1激活骨癌痛大鼠脊髓背角PI3K/Akt信号通路 目的:观测在骨癌痛大鼠模型鞘内注射MCP-1中和抗体后，其痛阈的改变以及脊髓背角p-Akt表达的变化。 方法: SPF级雌性 Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重190~210g，随机分为5组（n=8）：假手术组（I组），于大鼠左侧骨干骺端骨髓腔内注射10μl PBS液；假手术+MCP-1中和抗体组（II组），在注射 PBS液后7~9d鞘内注射 MCP-1中和抗体(1μg/μl)10μl，每天1次；骨癌痛组（III组），于大鼠左后肢胫骨干骺端骨髓腔内注射乳腺癌细胞Walker25610μl(2×107/ml)构建胫骨癌痛模型；骨癌痛+对照IgG组(IV组)，在注射肿瘤细胞后7~9d鞘内注射对照IgG(1g/L)10μl，每天1次；骨癌痛+MCP-1中和抗体组（V组），在注射 Walker256细胞后7~9d鞘内注射 MCP-1中和抗体(1g/L)10μl，每天1次。观测术前1d，术后1、3、5、7、8、9d各组大鼠机械痛阈。术后9d给药测痛后处死大鼠，取各组大鼠的L4-6脊髓组织进行免疫荧光染色和Western Blots，检测脊髓背角p-Akt的表达。 结果:与I组相比，骨癌痛（III、IV组）大鼠机械痛阈明显下降(P<0.01)，脊髓背角p-Akt阳性细胞数显著增加，蛋白表达上调(P<0.01)，而II组上述指标无明显差别(P>0.05)。与III组或IV组比较，V组鞘内注射MCP-1中和抗体后能明显提高骨癌痛大鼠的机械痛觉阈值(P<0.01)，降低脊髓背角p-Akt的表达(P<0.01)。 结论: MCP-1可能通过激活脊髓背角PI3K/Akt信号通路参与大鼠骨癌痛的发生。 第三部分：鞘内注射LY294002缓解大鼠骨癌痛 目的:观察鞘内注射PI3K抑制剂LY294002后，骨癌痛大鼠在疼痛行为学和脊髓背角小胶质细胞的表达及活化方面的改变。 方法: SPF级雌性 Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重190~210g，随机分为5组（n=8）：假手术组（I组）、假手术+LY294002组（II组）、骨癌痛组（III组）、骨癌痛+5％DMSO（IV组）、骨癌痛+LY294002组（V组）,于大鼠左侧胫骨干骺端骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞10μl(2×107/ml)构建胫骨癌痛模型。术后7~9d鞘内连续注射PI3K抑制剂LY2940022.5μg/10μl或5%DMSO10μl。观测术前1d，术后1、3、5、7、8、9d大鼠机械痛阈值。术后7d给药前及给药后1~8小时，每小时测定各组大鼠机械痛阈值。术后9d给药后处死大鼠，取各组大鼠的L4~6脊髓组织进行免疫荧光染色和Western Blots，检测脊髓背角小胶质细胞标记物OX-42的表达。 结果:与I组相比，骨癌痛（III、IV组)大鼠机械痛阈明显下降(P<0.01)，脊髓背角小胶质细胞数量明显增加，OX-42表达增加(P<0.01)，而II组上述指标无明显差别(P>0.05)。与III、IV组比较，V组在鞘内注射LY294002后2~4h痛阈明显升高(P<0.05)，3h达到峰值(P<0.01)，连续鞘内注射3d后能明显提高骨癌痛大鼠的机械痛觉阈值(P<0.05)，降低脊髓背角OX-42的表达，抑制小胶质细胞的活化(P<0.01)。 结论: PI3K/Akt信号通路可能通过活化脊髓背角小胶质细胞参与大鼠骨癌痛的发生。
骨肿瘤;癌痛调控;分子机制;信号通路;小神经胶质细胞;PI3K抑制剂
苏州大学
硕士
麻醉学
杨建平;王丽娜
2015
中文
R738.1
76
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）