鸡肝脏microRNA-122表达调控机制和功能研究
MicroRNA是一类单链小分子非编码RNA，在基因转录后水平通过和靶mRNA的碱基配对导致翻译抑制或mRNA降解，参与器官的发育、细胞的分化、增殖、凋亡等多种生物学过程，且和多种疾病密切相关。miR-122是在肝脏中高表达的miRNA，在肝脏的生长发育、脂类代谢等过程发挥重要作用，它的异常表达还跟肝脏疾病的发生发展有关。本研究以鸡miR-122为研究对象，对其表达调控机制和功能方面进行了研究，结果如下： (1)运用生物信息学分析和5’RACE方法确定了鸡miR-122的转录起始位点位于pre-miR-122上游的3294(chrZ:757760)位置，用序列删除技术证明鸡miR-122核心启动子区位于pre-miR-122上游3.8~3.2 kb区域。 (2)为了研究鸡miR-122的表达调控机制，我们预测到在鸡miR-122的启动子区含有转录因子HNF3β的结合位点，将这个位点突变后能明显降低miR-122的启动子活性，用EMSA研究发现HNF3β能够在体外和鸡miR-122的启动子区结合，推测HNF3β能结合该位点激活miR-122的转录。 (3)通过生物信息学预测和双荧光素酶报告系统证明 VNN1和 BZW2是miR-122的靶基因，靶位点突变实验证明VNN1和BZW2基因的3’UTR与miR-122种子区的互补位点为靶位点。 (4)将miR-122在LMH细胞中过表达后，发现靶基因BZW2 mRNA表达水平显著下降，VNN1 mRNA表达水平没有显著变化。利用LNA-antimiR-122抑制鸡肝脏原代细胞中的miR-122后，miR-122的靶基因VNN1和BZW2 mRNA表达水平都呈显著性上升。结果表明靶基因BZW2在mRNA水平上受到miR-122的负性调控，而VNN1在mRNA水平上不受到miR-122的调控。 (5)靶基因VNN1在不同组织中的表达特征跟miR-122的表达特征相一致，都是在鸡肝脏中表达量最高，其次是肺，在脾、肾、脂肪中微量表达，在其他组织中表达量极低，表明VNN1和miR-122之间的联系非常紧密，其在肝脏中可能发挥着重要功能。而BZW2在脾中表达量最高，在鸡肝脏中表达量较低。 (6)在不同生长发育时期的鸡肝脏中，靶基因VNN1的表达量有一定的波动，在同一时期不同个体间的差异较大，而 BZW2的表达量呈先下降再升高再下降的趋势，推测VNN1和BZW2在鸡肝脏发育时期mRNA水平表达量跟miR-122不相关。
肝脏疾病;miR-122分子;异常表达;生长发育;脂类代谢
苏州大学
硕士
遗传学
顾志良
2015
中文
R575;R363
96
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）