FK866对卵巢癌SKOV3细胞生物学特性及化疗敏感性的影响
目的：研究烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及上皮性卵巢癌的表达和分布情况，并通过Nampt特异性抑制剂FK866作用于卵巢癌SKOV3细胞探讨Nampt参与卵巢癌的作用机制，并通过FK866联合顺铂(cisplatin, DDP)用药观察是否增强卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性。 方法：(1)免疫组织化学法、Western-Blot以及RT-PCR检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及上皮性卵巢癌中Nampt的表达情况，并对上皮性卵巢癌相关临床病理因素与Nampt的表达情况进行相关性分析；(2)MTT法检测空白对照组、FK866组、顺铂组及FK866联合顺铂组对卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响，并计算半抑制浓度(IC50)；(3)流式细胞术检测空白对照组、FK866组、顺铂组及FK866联合顺铂组对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响；(4) Western-Blot检测空白对照组、FK866组、顺铂组及FK866联合顺铂组对相关信号通路蛋白Nampt、SIRT1、p53表达的影响。 结果：(1) Nampt在正常卵巢组织中低表达，而在上皮性卵巢癌中高表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。Nampt在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤中主要表达于胞浆，而在上皮性卵巢癌中胞浆和胞核均高表达，且胞核表达强于胞浆；(2) Nampt的表达与上皮性卵巢癌的分化程度呈正相关，与组织学类型、临床分期和腹膜转移无明显相关性；(3)MTT法结果显示， FK866浓度为0.01、0.1和1nM在24、48及72小时后细胞活性无明显差异(P>0.05)，而在10nM、100nM和1000nM浓度下呈明显时间-剂量依赖性，差异具有统计学意义(P<0.05)。当顺铂浓度为0.625、1.25ug/ml时，单药和联合FK866(1nM)作用SKOV3细胞24和48h对细胞活性无明显统计学差异(P>0.05)。与顺铂单药相比，FK866(1nM)联合顺铂浓度为2.5、5、10和20ug/ml浓度下可以显著抑制SKOV3细胞活性，明显增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性，具有统计学差异(P<0.05)。(4)流式细胞术实验结果表明：与对照组相比，FK866(10nM)、顺铂单药组(5ug/ml)及联合用药组细胞凋亡显著增加(P<0.05)，而FK866和顺铂单药组比较无统计学差异(P>0.05)，FK866联合顺铂组与各单药组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；(5)Western-Blot检测FK866和顺铂作用于SKOV3细胞后，与对照组相比，FK866显著抑制Nampt和SIRT1蛋白的表达，而与顺铂联用后，抑制作用更显著，而FK866和顺铂单药作用后p53表达呈上升趋势，而两药合用后，p53表达上升趋势更显著。 结论：(1) Nampt在正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤中低表达，在上皮性卵巢癌中高表达，而Nampt在上皮性卵巢癌的表达与分化程度呈正相关，可能与卵巢癌的恶性分化密切相关；(2)一定条件下，FK866可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长增殖，并促进SKOV3细胞凋亡，并可增强SKOV3细胞对顺铂的敏感性；(3)FK866抗卵巢癌的作用机制可能与抑制Nampt和SIRT1的活性，上调p53基因的表达有关；(4)本研究提示FK866联合顺铂用药在抗卵巢癌中具有潜在应用价值，并为临床上治疗上皮性卵巢癌提供了一种新思路。
卵巢癌;细胞生物学;化疗敏感性;顺铂浓度
三峡大学
硕士
妇产科学
叶红
2015
中文
R737.31
46
2015-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）