双酚A与GPER激活促血管内皮细胞增殖作用研究
目的：双酚A（Bisphenol A，BPA）是一种普遍使用的工业原料，具有内分泌干扰作用，有证据表明长期暴露于BPA对心血管系统有危害作用，但具体机制尚待研究。GPER（G protein-coupled estrogen receptor）是新近发现的膜雌激素受体，在多种疾病中发挥作用。本研究观察GPER在BPA影响血管内皮细胞功能中的作用以及探讨GPER受体的介导机制。 方法：采用体外培养牛主动脉内皮细胞为体外细胞实验模型，以不同剂量的双酚A（10nM~10μM）或G1（GPER特异性激活剂，10nM~10μM）干预，观察它们对内皮细胞的活性、增殖和迁移水平的影响。用Western Blot方法检测内皮细胞中Cav-1、HSP90、和HIF1-α蛋白的表达水平，信号蛋白ERK1/2、PKA的磷酸化水平，以及PKA磷酸化底物水平；用RT-PCR法检测内皮细胞中VEGF和VEGFR mRNA表达水平；用免疫荧光和免疫共沉淀方法检测Cav-1和GPER之间的相互作用。 结果：（1）GPER在牛主动脉内皮细胞中存在表达；G1在低浓度（10nM）下对内皮细胞的活性、增殖和迁移作用有促进作用（p<0.05），在高浓度（10μM）下则作用相反（p<0.05）。 （2）G1能上调ERK1/2磷酸化水平，并使内皮细胞HIF-1α蛋白升高（p<0.05）和VEGFR mRNA水平升高（p<0.05）；G1的促增殖作用可被GPER受体特异性阻断剂G15或ERK1/2通路特异性阻断剂PD98059所阻断。 （3）高浓度(μM级别)的双酚A或G1都能上调内皮细胞Cav-1蛋白的表达，蛋白相互作用研究发现G1可促进Cav-1和GPER的相互作用，双酚A可降低HSP90蛋白表达水平和并上调PKA信号蛋白的磷酸化水平。 结论：GPER作为一种新的受体，其激活对内皮细胞的活性、增殖和迁移功能产生明显的影响；GPER作用的发挥和胞膜窖决定蛋白（Cav-1）有关。双酚A影响血管内皮细胞Cav-1的表达调控，并可通过PKA信号通路作用于其下游蛋白，可通过GPER作用于内皮细胞，通过一系列机制（如ERK1/2、HIF-1α等）促进内皮的增殖和迁移，并造成长期低剂量危害。
双酚A;膜雌激素受体;血管内皮细胞;增殖机制
华中科技大学
硕士
营养与食品卫生学
应晨江
2014
中文
R994.3
57
2015-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）