PI3K/AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究
实验目的: 通过观察单用LY294002,顺铂以及LY294002与顺铂联合应用对细胞的抑制增殖作用,探讨PI3K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113/CDDP的可行性。 材料与方法: 1.间歇的给药,逐渐的增加剂量,连续在体外诱导培养人舌磷癌顺铂耐药细胞;加药培养2天,培养基中含0.3μg/mL的CDDP,2天后更换成正常培养液。待细胞正常传代后重复加药一次。在进入下一个浓度(以起始浓度的1倍间歇性加药)前培养一周,诱导耐药细胞产生。 2.实验分为耐药细胞TCA8113/CDDP组和正常癌细胞TCA8113组。分别以5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l,40μmol/l浓度 LY294002分别作用于 TCA8113和TCA8113/CDDP细胞24h,48h;联合抑制率以各细胞顺铂IC50浓度联合LY294002作用于两组细胞24h。MTT法对比药物对两种细胞抑制率的影响。 3.实验分为空白组,对照组,实验组。空白组不加药物,对照组加顺铂IC50浓度,实验组分别加浓度为5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l,40μmol/l PI3K抑制剂LY294002和顺铂,浓度为其相应的IC50值。药物作用时间为24h,24h后提取总蛋白质,采用蛋白免疫印迹的方法分析LY294002作用前后通路相关蛋白p-Akt、Akt、PI3K的表达。结果 1.建立TCA8113/CDDP耐药细胞,耐药倍数为7.7。 2. MTT显示作用时间越长,作用浓度的越大,LY294002对 TCA8113及TCA8113/CDDP细胞的抑制作用越强。LY294002与顺铂联合应用对两种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好。 3. PI3K、Akt、p-AKT蛋白表达明显降低。其中TCA8113/CDDP细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多(p<0.05)。 结论: 1. LY294002能够抑制TCA8113及TCA8113/CDDP细胞增殖,具有浓度和时间依赖性。 2. LY294002能增加耐药口腔鳞癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性。
舌鳞癌;Akt信号转导通路;PI3K表达;耐药细胞;化疗药物
佳木斯大学
硕士
口腔临床医学
李德超
2014
中文
R739.86;R730.44
42
2015-08-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)