转基因斑马鱼和罗非鱼耐寒性能的研究
虽然通过传统的杂交育种和选育的方法培育出了在北方地区生长速度快、抗寒力强的荷包红鲤、高寒鲤抗寒品系等优良品种，但鲮鱼(Cirrhinus molitorella)、罗非鱼等还不能依靠传统的育种方法获得抗寒品系。这就要求从基因表达水平研究鱼类的耐低温机制，本实验主要是研究东北地区的具有耐低温性状的黑龙江鲤(Cyprinus carpio)的MIPS基因在斑马鱼和罗非鱼中的表达情况。 构建的外源表达载体在斑马鱼中的荧光观察结果显示，两个重组表达载体均不影响EGFP的表达，只是表达强度存在一定差异，未插入外源目的基因的重组表达载体中EGFP基因的表达强度明显高于插入外源目的基因的重组表达载体 EGFP基因的表达。重组表达载体的成功构建显示金鱼 Tgf2转座子和普通表达载体可以介导外源基因在斑马鱼中的表达。 对转基因斑马鱼F1、F2代和转基因罗非鱼F1代进行PCR检测，结果显示靶基因MIPS的编码区能够完整的整合到斑马鱼和罗非鱼基因组中，检测注射 pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的转基因斑马鱼F1代整合效率达31.4％；检测注射普通表达载体的转基因斑马鱼F1代整合效率达30.4%；检测注射表达载体 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的转基因斑马鱼F2代整合效率达18.1%；检测注射表达载体 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的转基因罗非鱼整合效率达6.01%，证实外源目的抗寒基因MIPS在转基因斑马鱼和罗非鱼中都有表达。 以PCR实验检测出外源目的基因转基因斑马鱼F2代个体和罗非鱼 F1代个体为实验鱼进行的低温耐受实验，结果显示转基因组的半致死时间为37.86 h大于未转基因的对照组37.76 h。根据卡方计算公式进行两组半致死时间的比较，得 X2=0.000小于0.05，说明转基因组和对照组的半致死时间的差异不显著，即转基因个体和对照组在耐低温能力上没有明显的区别。斑马鱼实时荧光定量 PCR实验结果显示，抗寒基因MIPS在常温转基因斑马鱼中表达量最高，在低温耐受实验中最后死掉的转基因斑马鱼中表达量次之；罗非鱼的实时荧光定量 PCR结果显示，抗寒基因 MIPS在脾中表达量最高，其次是鳃、肠、肾、心和肝。
转基因斑马鱼;罗非鱼;耐寒性能;MCs序列;实时荧光定量PCR
宁波大学
硕士
渔业
李明云
2014
中文
S917.4;S965.125
64
2015-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）