泥蚶血红蛋白及其多肽的抗菌功能和应用研究
课题组前期克隆得到了三种泥蚶血红蛋白亚基基因，并从mRNA表达上初步发现了泥蚶血红蛋白参与了抗菌免疫反应，本研究拟从蛋白水平上探索泥蚶血红蛋白是否具有抗菌活性，进一步研究泥蚶血红蛋白抗菌功能及机制。 本研究以基地养殖的泥蚶为试验材料，采用凝胶排阻色谱将泥蚶血红蛋白分离纯化，由此获得三种血红蛋白，根据测定蛋白质天然状态下分子量的标准曲线推测这三种物质分别为杂蛋白、异源四聚体、同源二聚体。Tricine-SDS-PAGE的电泳结果进一步证明已经分离纯化出泥蚶的两种血红蛋白。将纯化的两种血红蛋白采用胰蛋白酶酶解，并使用反相C-18柱进行分离纯化。通过琼脂糖弥散法检测两种血红蛋白及酶解多肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的抗菌活性。结果显示泥蚶血红蛋白对金黄色葡萄球菌和三种弧菌没有抑菌活性，而泥蚶血红蛋白酶解多肽只对副溶血弧菌、溶藻弧菌有抑菌活性。 为进一步定量抗菌活性，采用96孔板微量对倍稀释法测定了泥蚶血红蛋白纯化样品以及异源四聚体酶解多肽的最低抑菌浓度(MIC值)，发现泥蚶血红蛋白HbⅠ对大肠杆菌的MIC为0.125mg/mL，对枯草芽孢杆菌的MIC为6.25×10-3mg/mL，对坚强芽孢杆菌的MIC为1.95×10-4mg/mL；泥蚶血红蛋白Hb II对大肠杆菌的MIC为0.375mg/mL，对枯草芽孢杆菌的MIC为4.69×10-3mg/mL，对坚强芽孢杆菌的MIC为1.95×10-4mg/mL；异源四聚体酶解的五种多肽对副溶血弧菌的最低抑菌浓度均为1×10-2 mg/mL；第1、3两种多肽对溶藻弧菌的最低抑菌浓度为2.5×10-3 mg/mL，第2、4、5三种多肽对溶藻弧菌的最低抑菌浓度为5×10-3 mg/mL。 以上研究发现泥蚶血红蛋白及其酶解多肽均具有不同程度的体外抑菌活性，这个结果在无脊椎动物，特别是贝类中验证了血红蛋白具有除携氧外的其它生物学功能，有助于拓展对贝类先天免疫机制的了解，为探索泥蚶血红蛋白在非特异性免疫反应中的作用并为进一步解析其抗菌机理奠定了基础。
泥蚶;血红蛋白;抗菌功能;免疫反应
宁波大学
硕士
渔业
严小军
2014
中文
S917.4
74
2015-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）