两株海洋真菌次级代谢产物及其生物活性研究
本实验以海洋青霉菌（Penicillium dipodomyicola）DJ008和海洋花斑曲霉（Aspergillus versicolor）DJ013为对象，研究其次级代谢产物和生物活性。借助硅胶、凝胶柱层析的方法获得 DJ008次级代谢产物中的单体化合物，结合质谱（MS）和核磁共振（NMR）鉴定化合物结构。通过优化培养基配方和培养时间来提高特征产物产量。利用组蛋白去乙酰化抑制剂（HDACi）2-hexyl-4-pentynoic acid（37.5 mg/L）调控 DJ013次级代谢途径。结合色谱和光谱方法确定 DJ013实验组产生空白组未产生的化合物的结构。本实验主要包括以下四部分内容： 1、菌种的分离和筛选。在这部分实验中，从采自东极岛的沉积物中分离得到五株真菌，利用化学筛选和表观遗传学筛选相结合的方法筛选出两株真菌，即DJ008和 DJ013。这两株菌经形态学和分子学鉴定为海洋青霉菌 Penicillium dipodomyicola）和海洋花斑曲霉（Aspergillus versicolor）。 2、DJ008次级代谢产物的获得。利用正相硅胶将浸膏分成不同的极性段，收集含目标化合物的极性段，通过再次纯化获得单体化合物。借助 MS和 NMR确定化合物的结构为5-（羟甲基）呋喃-3-羧酸（flufuran），细胞毒活性测试结果表明，flufuran对人白血病细胞 HL60和人肺癌细胞 A549无显著抑制作用。 3、发酵工艺优化。对 DJ008开展培养基配方优化和培养时间优化两方面的工作。在马铃薯浸出粉10g，可溶性淀粉20g，1L海水（1 L纯水加入35g海水晶），25℃，150rpm培养12d的条件下，flufuran的产量可达到1.91g/L。 4、DJ013次级代谢产物合成途径的调控。在 DJ013培养的过程中加入2-hexyl-4-pentynoic acid(37.5 mg/L)，对发酵液粗提物进行HPLC检测。在加入2-hexyl-4-pentynoic acid的发酵液中产生了空白组未能产生的次级代谢产物，利用色谱和光谱方法确定该化合物为弯孢霉菌毒素 curvularin，该化合物对人白血病细胞 HL60以及人肺癌细胞 A549无显著抑制作用。 本文通过培养基配方优化和培养时间优化提高了 DJ008的次级代谢产物flufuran的产量，为其他提高天然产物来源的研究提供了实验方法上的依据。利用HDACi2-hexyl-4-pentynoic acid调控DJ013的次级代谢产物合成途径，使其产生新的化合物，对采用化学方法调控海洋真菌基因表达的研究有重要意义。
海洋青霉菌;海洋花斑曲霉菌;次级代谢产物;生物活性;结构鉴定
宁波大学
硕士
海洋生物学
严小军
2014
中文
Q949.32;R285.5
75
2015-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）