穿心莲总内酯固体脂质纳米粒的研究
目的：本文以穿心莲总内酯提取物（Total Lactones from Andrographis paniculata，TLA）为模型药物，采用星点设计-效应面法优化穿心莲总内酯固体脂质纳米粒（TLA-SLN）的制备工艺，并对其进行体内外评价，包括包封率、载药量、粒径、Zeta电位、稳定性、体外释放规律、Caco-2单层细胞中的转运机制、药代动力学及降血脂药效学等评价项目，以探索TLA作为SLN进行口服给药载体的可行性。 方法：以TLA中主要内酯类成分穿心莲内酯（Andrographolide，AND）、新穿心莲内酯（Neoandrographolide，NEO）、14-去氧穿心莲内酯（14-Deoxy-andrographolide，DEO）和脱水穿心莲内酯（Dehydroandrographolide，DEH）为主要考察对象、分别建立包封率和载药量的HPLC测定方法，并采用星点设计-效应面法对TLA-SLN的处方工艺进行优化；以TLA-SLN的形态、粒径、Zeta电位和pH值等为考察指标，结合差示扫描量热分析法对TLA-SLN及其冻干粉进行质量评价，并运用透析袋法对TLA溶液、TLA混悬液、TLA-SLN混悬液及其冻干粉进行体外释放度研究；采用LC-MS建立大鼠血清中穿心莲总内酯的定量分析方法，对TLA及TLA-SLN在大鼠体内的药代动力学和口服生物利用度进行研究；采用UPLC-MS建立细胞培养液中穿心莲总内酯的定量分析方法，对TLA及TLA-SLN在Caco-2细胞模型中的转运机制进行研究；以75％蛋黄乳剂建立小鼠急性高脂血症模型，研究TLA及TLA-SLN在降脂方面的活性。 结果：通过星点设计-效应面法得到TLA-SLN的最优处方：药物与脂质材料比为10%、磷脂脂质比为1.25、Tween-80在水中的浓度百分比为4%。通过体外评价表明，TLA-SLN的平均粒径为322.67±2.50 nm；分散度（PDI）为0.25±0.03；Zeta电位为-27.98±1.19 mV；pH为5.10±0.01；透视电镜扫描发现其形状为椭圆形或不规则的形状；差示扫描量热分析发现TLA-SLN在47.5℃处形成明显的特征吸热峰。稳定性研究发现，TLA-SLN混悬液不稳定，而其冻干粉稳定性得到较明显改善。大鼠肠道灌流液中的稳定性结果表明，TLA在十二指肠灌流液中极易发生转化，而制成固体脂质纳米粒后，其稳定性得到提高。体外释放研究表明，TLA水溶液在8 h内释放97.86±9.78%，而TLA-SLN与冻干粉在24 h后才释放完全，释放属于一级释放速率方程，表明药物具有缓释作用。而TLA混悬液则在24 h时释放65.83±9.46%，释放模型为Hixon-crowell方程。药动学研究结果表明，大鼠口服TLA-SLN混悬液后，指标成分AND的血药浓度Cmax为23.06±12.27 ng·mL-1，显著高于口服TLA混悬液后AND的Cmax4.00±1.94 ng·mL-1（P<0.01），相对生物利用度为402.62%。新穿心莲内酯（NEO）的血药浓度Cmax为34.43±21.34 ng·mL-1，显著高于口服TLA混悬液后NEO的Cmax5.75±3.45 ng·mL-1（P<0.05），而且生物利用度提高4倍。脱水穿心莲内酯（DEH）的血药浓度Cmax为139.25±62.98 ng·mL-1，显著高于口服TLA混悬液后DEH的Cmax25.18±16.12 ng·mL-1（P<0.01），生物利用度提高16倍。考察TLA及TLA-SLN吸收与转运机制，得到TLA-SLN中AND在Caco-2细胞转运模型中的表观渗透系数Papp为（8.94±0.45）×10-6 cm·s-1，显著高于混合标准品、穿心莲总内酯提取物中AND的Papp（5.77±0.05）×10-6、（6.63±0.78）×10-6 cm·s-1（P<0.01）。TLA-SLN中DEH在Caco-2细胞转运模型中的Papp为（10.71±0.58）×10-5 cm·s-1，显著高于混合标准品，TLA中DEH的Papp（6.18±0.20）×10-5、（6.39±0.20）×10-5 cm·s-1（P<0.01）。降血脂药效学实验结果表明，通过口服TLA-SLN能显著降低小鼠血清中胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）和甘油三酯（TG）水平（P<0.05），提高小鼠血清中高密度脂蛋白（HDL）水平（P<0.05）。而相同剂量的TLA组具有降脂作用的趋势，作用不明显。说明TLA-SLN能提高TLA的口服生物利用度和降脂活性。 结论：通过将TLA制备成TLA-SLN后能改善其溶解度、稳定性差的缺陷。通过提高溶解度和释放、降低穿心莲内酯类成分在肠道（尤其十二指肠）的转化，并影响其在肠道的转运方式，从而大大提高了TLA中内酯类成分的口服生物利用度和降脂活性。因此，TLA-SLN是一种具有研究潜质的新型口服给药系统。
穿心莲总内酯;固体脂质纳米粒;药效学;Caco-2细胞;转运机制;口服给药
新疆医科大学
硕士
药剂学
李岩王长虹
2012
中文
R283
100
2015-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）