生物碱类胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究
目的：多药耐药性（MDR）是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一，从中药单体、复方中筛选高效、低毒的肿瘤耐药逆转剂是目前抗肿瘤药物研究的新策略。本研究以人胃癌亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/VCR为细胞模型，骆驼蓬碱（HM）、去氢骆驼蓬碱（HMI）、贝母素甲（PM）、贝母素乙（PMI）和氧化苦参碱（OMT）等5种生物碱类药物为研究对象，体外筛选MDR逆转剂，研究其耐药逆转活性及作用机制，为临床治疗多药耐药性胃癌提供逆转策略。 方法： （1）MTT法检测HM、HMI、PM、PMI和OMT的细胞毒性及耐药逆转效果； （2）流式细胞仪检测筛选出的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素（ADR）蓄积的影响； （3）Western blot法检测贝母素乙干预后P-糖蛋白（P-gp）的表达变化； （4）流式细胞仪检测贝母素乙诱导SGC7901/VCR细胞凋亡的百分率变化； （5） Western blot法检测贝母素乙诱导细胞凋亡时 Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白的表达差异； （6）细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导耐药细胞凋亡的过程中Cleaved caspase-3蛋白表达差异。 结果： （1）HM、HMI、PM、PMI和OMT均能不同程度的抑制亲本细胞SGC7901和耐药细胞SGC7901/VCR的增殖作用，非毒性剂量的贝母素乙能够显著提高 SGC7901/VCR细胞对化疗药物长春新碱（VCR）、阿霉素、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、顺铂（CDDP）敏感性。 （2）非毒性剂量的贝母素乙能够显著提高 SGC7901/VCR细胞内 ADR的蓄积，降低P-gp的表达。 （3）贝母素乙联合5-Fu可诱导耐药细胞凋亡： ①流式细胞仪结果显示：对照组单独使用贝母素乙或5-Fu时，细胞凋亡百分率小于15％，实验组联合用药时，细胞凋亡百分率分别为：17.8%、29.5%、44.5%； ②Western blot法检测结果显示：实验组和对照组的Bcl-2和Bax蛋白表达差异无统计学意义，而Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达呈剂量依赖性和时间依赖性增加。 ③细胞免疫荧光法检测证明了贝母素乙联合5-Fu可诱导耐药细胞凋亡，其凋亡机制与激活Caspase-3产生Cleaved caspase-3剪切体的相关。 结论：贝母素乙能够作为胃癌多药耐药逆转剂逆转MDR，其逆转机制与下调P-gp蛋白表达和激活Caspase通路诱导耐药细胞凋亡相关。
胃癌;生物碱类药物;多药耐药逆转剂;P-gp蛋白;细胞凋亡
新疆医科大学
硕士
药剂学
顾政一
2012
中文
R735.2;R965.1
51
2015-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）