兰科菌根真菌与兰科植物黄花白及的共生关系研究及绿色荧光蛋白标记体系的初步构建
近年来,兰科植物及其菌根真菌共生关系的研究成为一个热门话题。在自然条件下,兰科植物种子的萌发和植株的生长都离不开菌根真菌的参与。黄花白及(Bletilla ochrace Schltr.)是一种地生兰科植物,也是贵州省境内重要的中药材之一。近年来由于人们的过度采挖和生境的破坏,导致其野生资源日趋濒危。 本研究通过对兰科植物黄花白及菌根真菌的分离,将分离的的菌根真菌与黄花白及种子重新构建建立共生体系,筛选并鉴定出对黄花白及种子有促生作用的真菌种类,并尝试建立促生真菌 Sebacina sp.绿色荧光蛋白(GFP)标记的遗传转化体系。上述研究将为深入研究兰科植物与菌根真菌的相互作用,进一步研究兰科植物与内生真菌之间的关系提供新的思路和借鉴,也为菌根真菌在野生兰科植物人工驯化中的作用提供理论依据。本研究具体研究结果如下: 1.采用传统的组织培养方法,分离黄花白及的菌根真菌,通过形态学和分子学鉴定两株有促生作用的菌根真菌,分别为Epulorhiza sp.和Sebacina sp.。 2.分别将Epulorhiza sp.和Sebacina sp.两株菌根真菌与黄花白及种子进行共生萌发,Epulorhiza sp.和Sebacinasp.两株菌根真菌对黄花白及种子的萌发具有显著的促进作用,比对照的萌发率分别高出8.61％和18.43%,并且将共生体切片显微观察,在黄花白及萌发的种子组织中观察到典型的兰科菌根结构。 3.建立 Sebacina sp.菌根真菌原生质体的制备方法,原生质体制备的优化条件为:液体YEPG中培养了60 h的新鲜幼嫩菌丝,在28℃下,使用裂解酶(10 mg/ml)与崩溃酶(20 mg/ml)作为组合酶解液、1.2 mol/L KCl酶解1.5h,原生质体产量达到5×107个/ml。 4.本研究对 Sebacina sp.的原生质体进行 CaC12-PEG介导的GFP基因的遗传转化和对 Sebacina sp.菌丝进行根癌农杆菌介导(ATMT)的GFP基因的遗传转化的初步试验,确定其对潮霉素的敏感性,并探索了一些遗传转化的条件,为进一步得到转化子奠定重要基础。
兰科植物;菌根真菌;黄花白及;共生关系;绿色荧光蛋白
贵州师范大学
硕士
生物化学与分子生物学
陶刚
2014
中文
Q949.718.43;Q948.122.2
58
2015-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）