竹节参多糖分离纯化及总皂苷提取工艺和质量控制研究
目的：对中药竹节参主要组成成分竹节参总皂苷和竹节参进行多糖常用提取纯化工艺进行比较研究,以体外抗氧化模型对主要活性成分竹节参总皂苷的不同工艺提取物进行活性筛选,明确竹节参总皂苷的最佳提取工艺；并对其主要化学组分进行分析,将有药效活性的的竹节参单体成分配成有效主成分群,比较有效主成分群与供试品间活性差异,验证以部分代替整体活性指标的可行性,以此为基础建立活性主成分的多成分定量方法,建立科学合理、重现性良好的竹节参总皂苷活性相关质量标准。 方法：(1)采用传统水提醇沉工艺对竹节参多糖进行提取分离,用Sevag法脱去粗多糖中所含有的游离蛋白质,流水透析法除去小分子寡糖或皂甙等,Sephadex G-100凝胶分离纯化竹节参多糖,利用红外光谱法初步鉴定多糖的结构。(2) 针对皂苷的亲脂性苷元和亲水性的寡糖链组成采用泡沫分离法提取竹节参皂苷,以富集比、纯度比、回收率为评价指标,对气泡大小、原料液温度、PH、电解质浓度等影响泡沫分离的主要因素进行考察,优化泡沫分离法提取竹节参皂苷工艺。(3)采用水提乙醇沉淀、60%乙醇加热回流提取和60%乙醇超声提取等工艺提取竹节参皂苷,并利用大孔吸附树脂进行纯化；以体外抗氧化模型对竹节参总皂苷的不同工艺提取物进行活性测试,并考察提取物中总皂苷含量和齐墩果酸含量,确立总皂苷最佳提取工艺。(4) 将有药效活性的的竹节参单体配制成与药材提取物中含量相当的浓度(有效主成分群),以体外抗氧化模型评价主有效成分群与提取物活性成分差异。 结果：(1)红外光谱分析竹节参多糖为含有吡喃糖环的多糖。(2)当气泡直径在0.4-0.5mm、温度65℃、pH值5.5、电解质NaCl浓度为0.015mol/L时,总皂苷富集比为2.1,纯度比为2.6,回收率为98.33%。泡沫分离工艺条件最佳。(3)乙醇超声提取法所得竹节参总皂苷提取物体外抗氧化活性相对较高达到 71.30 U/g,总皂苷提取率、齐墩果酸转移率相对较高,分别达到99.31%和33.59%。(4) 最佳工艺提取物中竹节参皂苷V含量24.9 mg·g-1、竹节参皂苷Ⅳa含量为90.6 mg·g-1、竹节参皂苷Ⅳ含量为38.7 mg·g-1、Pjs-2含量为41.1 mg·g-1,体外抗氧化活性为71.30 U·g-1,其主成分群体外抗氧化能力为64.79 U·g-1。以竹节参总皂苷有效主成分群作为药效评价指标的准确性高,以部分代替整体活性指标具有良好可行性。 结论：传统提取纯化方法所得竹节参多糖纯度较高,竹节参多糖为含有吡喃糖环的多糖；泡沫分离法对总皂苷具有较好的富集作用,整个过程中没有使用任何有机试剂,符合现代的环保意识,但对齐墩果烷型皂苷的富集率不高,60%乙醇超声提取法有效成分转移率高,提取成本较低,可广泛应用于大型工业化生产,为竹节参总皂苷的较优提取工艺。通过对竹节参总皂苷多成分含量测定实现对总皂苷质量的控制,一定程度上解决了化学成分和药效的相关性,建立了一种快速、简单、重现性良好的竹节参总皂苷活性质量标准。
竹节参多糖;竹节参总皂苷;提取工艺;体外抗氧化;质量标准
三峡大学
硕士
药理学
张长城;袁丁
2013
中文
R96
2014-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）