扶正祛瘀中药对体外培养子宫肌瘤细胞基质金属蛋白酶MMP-9及其抑制物TIMP-1表达的影响
目的：本实验由中医理论指导,结合分子生物学技术,对扶正祛瘀法防治子宫肌瘤(uterine leiomyoma,UL),扶正祛瘀中药—理冲汤对体外培养子宫肌瘤细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢的重要调节酶基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响进行观察和分析。探讨扶正祛瘀中药对子宫肌瘤细胞分子水平的影响及其对肿瘤细胞的抑制作用的机理,为中医药治疗子宫肌瘤提供新的切入点和研究思路,为其临床防治及其他相关科学研究提供实验依据。 方法：用wistar大鼠制备带药血清,将大鼠随机分为空白对照组、理冲汤高、低剂量组和化药对照组,每日2次进行灌胃给药,间隔6h,连续灌胃2天。空白对照组大鼠每日灌以蒸馏水。第3天给药2 h后再次给药,1 h后用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,心脏采血。离心取上清液,灭活并微孔滤膜过滤除菌分装后,-20℃保存备用。对3个月均未接受过激素和其他药物治疗的行子宫肌瘤全切术患者进行取材,选择肌瘤组织中间部分采用组织块培养法进行原代细胞培养。细胞传代后待第二代细胞生长贴壁达80%后调整细胞浓度接种至6/24/96孔板,分为正常对照组、空白对照组、理冲汤高、低剂量组和化药对照组,用大鼠含药血清进行各组对应给药。倒置显微镜下HE染色法观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖能力和肿瘤细胞抑制率,蛋白质印迹(Western blotting)技术检测体外培养子宫肌瘤细胞基质金属蛋白酶MMP-9及其抑制因子TIMP-1的蛋白表达。 结果：(1)HE染色光镜下观察：正常体外培养的子宫肌瘤细胞呈梭形,核仁清晰,胞浆透明饱满,与空白对照组相比,理冲汤高、低剂量组和化药对照组的细胞均出现不同程度的沙化及胞浆萎缩乃至细胞死亡的状况。 (2)CCK-8检测对肿瘤细胞增值的影响：与空白对照组相比,理冲汤高、低剂量组及化药对照组OD值均显著降低,差异有统计学意义。 (3)蛋白质印迹(western blotting)技术观察结果： MMP-9：与空白对照组比较,理冲汤低剂量组、化药对照组MMP-9的阳性表达均明显降低,差异有统计学意义；而与空白对照组比较,理冲汤高剂量组MMP-9的阳性表达虽有所降低,但差异不具有统计学意义；与化药对照组相比,理冲汤高、低剂量组均无显著差异； TIMP-1：与空白对照组比较,理冲汤高剂量组、低剂量组及化药对照组的TIMP-1的阳性表达明显升高,差异有统计学意义；与化药对照组相比,理冲汤高、低剂量组均无显著差异。 结论：扶正祛瘀中药理冲汤能明显改变体外培养子宫肌瘤细胞的形态,对其生长和增殖有显著抑制作用,能降低基质金属蛋白酶 MMP-9 和升高其抑制物TIMP-1在体外培养子宫肌瘤细胞外基质中的表达水平；MMP-9和TIMP-1在子宫肌瘤的发生发展中起重要作用,参与子宫肌瘤的发病机制。综上所述,理冲汤具有抑制子宫肌瘤细胞生长的作用,其药理机制与降低子宫肌瘤细胞外基质中 MMP-9及提高TIMP-1的表达有关。
扶正祛瘀中药;子宫肌瘤;MMP-9;TIMP-1
河南中医药大学;河南中医学院
硕士
药理学
朱飞鹏
2013
中文
2014-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）