连翘木脂素对大、小鼠糖尿病模型的影响
目的：通过建立大、小鼠糖尿病模型来研究连翘木脂素对大、小鼠糖尿病模型的治疗作用,测定血液流变学指标、能量代谢指标、抗氧化指标等相关指标和观察肾脏、胰脏、胸腺、脾脏等组织的病理学形态学变化,初步探讨连翘木脂素对大、小鼠糖尿病模型的治疗作用及作用特点。 方法：采用腹腔注射肾上腺素的方法来建立小鼠高血糖模型。在造模前,二甲双胍组、连翘木脂素大、中、小剂量组分别给予相应的药物灌胃,空白组和模型组给予同体积0.1%CMC-Na灌胃,每日1次,连续7天。在给药第7天(禁食8h),给药2h后,除正常组外,造模各组均腹腔注射盐酸肾上腺素( 0.2mg/kg),正常组腹腔注射同体积的生理盐水,0.5h后眼球采血,采用葡萄糖氧化酶法测定血糖值,剪开腹腔,取同一部位肝组织测定肝糖原含量。 采用尾静脉注射链脲佐菌素的方法来建立小鼠糖尿病模型。购进动物正常饲养三天后,根据体重,尾静脉注射10mg/ml用柠檬酸缓冲液配制的链脲佐菌素溶液,给药剂量为 80mg/kg,7 日后尾静脉取血,测血清血糖值,选取 21.0mmol/L≥血糖值≥16.7mmol/L,并明显具有多饮多食多尿症状的小鼠,根据血糖值随机分为5组,二甲双胍组、连翘木脂素大、中、小剂量组分别给予相应药物灌胃,空白组和模型组给予同体积0.1%CMC-Na灌胃,每日1次,每天给药1次,连续给药30天,分别于给药的第10、20、30天尾部取血测禁食6小时血糖值,于第31天,禁食6h后,灌胃后2h,取血,分离血清,测血清中胰岛素、糖基化血清蛋白,取肝脏作匀浆,测肝糖原含量；取胰脏、肾脏甲醛固定,做组织病理切片。 采用舌下静脉注射链脲佐菌素的方法来建立大鼠Ⅰ型糖尿病模型。购进动物正常饲养3天,根据体重,舌下静脉注射 10mg/ml浓度的链脲佐菌素,给药剂量为 40mg/kg,5 日后尾静脉取血,测血清血糖值,并选取 21.0mmol/L≥血糖值≥16.7mmol/L,并明显具有多饮多食多尿症状的大鼠,根据血糖值随机均分为 5组,二甲双胍组、连翘木脂素大、中、小剂量组分别给予相应药物灌胃,空白组和模型组给予同体积0.1%CMC-Na灌胃,每日1次,每天给药1次,连续给药30天。分别于给药的第10、20、30天,于灌药2时后,尾部采血,分离血清,测禁食6 小时血糖值,末次给药 2 小时后,眼球取血,测血清中胰岛素( Ins)、胰岛素抗体、NO水平和NOS活力、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、超氧化物歧化酶(SOD)、糖基化血清蛋白。取血后处死大鼠,取胰脏、肾脏、心、肝、肺做切片,通过电镜观察其病理改变。 采用舌下静脉注射链脲佐菌素加特殊膳食诱导的方法来建立大鼠Ⅱ型糖尿病模型,任取10只作为空白组,不造模,其余大鼠为糖尿病组大鼠。糖尿病组大鼠喂养高糖高脂饲料(饲料组成：高糖高脂饮食(蔗糖∶猪油∶奶粉∶鸡蛋∶普通饲料=30：20：4：2：63)),空白组大鼠仅喂食普通饲料。4周后10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉糖尿病组大鼠,舌下静脉 25mg/kg链脲佐菌素,空白组仅注射柠檬酸缓冲液。注射5天后尾静脉取血测血糖值,选取21.0mmol/L≥血糖值≥16.7mg/L并明显具有多饮多食多尿症状的大鼠为造模成功大鼠。根据血糖值随机均匀分为 5组,空白组和模型组给予同剂量0.1%CMC-Na,其余各组给予相应药物。每天给药1次,连续给药30天,分别于给药的第10、20、30天测尾部取血测空腹6小时血糖值,于第 28 天,上代谢笼接取大鼠 24 小时尿液,测定尿蛋白含量。第 31 天,禁食6h 后,灌胃 2h 后,取血,一管为抗凝血,测定血液流变学变化,另一管为不抗凝血,3500r/min,离心 10 分钟,分离血清,严格按照试剂盒说明书测血清中胰岛素、胰岛素抗体、糖基化血清蛋白、尿肌酐、尿素氮、SOD、丙二醛、谷胱甘肽、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等指标,取胸腺、脾脏、胰腺、肾脏,分别用10%福尔马林液固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察病理变化。 结果：大、小鼠糖尿病模型均成功复制。与空白组相比,大、小鼠动物模型的各项指标均具有显著差异。连翘木脂素可以降低肾上腺素所致高血糖小鼠模型的血糖值,增加肝糖原的含量,抑制糖异生,维持血糖水平的稳定；降低链脲佐菌素所致小鼠模型的动态血糖值和糖化血清蛋白含量,升高肝糖原含量,改善胰腺和肾脏的病理变化；降低链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型的动态血糖值和糖化血清蛋白含量,增加胰岛素含量,降低胰岛素抗体水平,降低甘油三酯和胆固醇含量,升高超氧化物歧化酶(SOD)酶活力,降低一氧化氮(NO)水平和一氧化氮合酶(NOS)活力,改善胰腺、肾脏、心、肝、肺的病理变化；降低特殊膳食加链脲佐菌素诱导所致的大鼠糖尿病模型动态血糖值和糖化血清蛋白含量,增加血清 SOD 酶活力,降低丙二醛(MDA)水平,增加谷胱甘肽(GSH)水平,降低低密度脂蛋白胆固醇、胆固醇、甘油三酯含量,升高高密度脂蛋白胆固醇含量,降低血清肌酐和尿素氮含量,降低尿中尿蛋白含量,改善血液流变性,改善血液循环,改善胰腺、肾脏、胸腺、脾脏的病理变化。 结论：连翘木脂素对大、小鼠糖尿病模型有很好的保护作用。连翘木脂素通过降低糖异生,升高血清胰岛素含量,降低胰岛素抗体,修复胰岛β细胞从整体水平发挥降血糖作用；可能通过升高血清SOD酶活力,降低NO含量和NOS酶活力,升高谷胱甘肽,降低 MDA,增加抗氧化能力来起到保护作用；升高高密度脂蛋白胆固醇降低低密度脂蛋白胆固醇,降低甘油三酯、胆固醇含量来纠正脂代谢紊乱,改善肾、胰腺、胸腺、脾脏的病理变化,起到治疗糖尿病的作用。
糖尿病;糖尿病模型;连翘木脂素
河南中医药大学;河南中医学院
硕士
药理学
苗明三
2013
中文
2014-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）