人血管抑制因子vasostatin片段在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性检测
Vasostatin是一种新型的血管生成抑制因子,为钙网素(Calreticulin)蛋白N′端结构域片段第1-180个氨基酸,具有抑制内皮细胞增殖、抑制血管生成的生物功能,其主要活性部位存在于第120-180个氨基酸片段中。为了确定vasosatatin蛋白的更短活性片段,本实验以含全长人vasostatin蛋白cDNA序列的质粒pUC18为模板,PCR扩增四条不同长度的vasostatin片段,分别插入到质粒pGEX-4T-3的BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点间,构建成重组质粒pGEX-4T-3/vasostatin-A、pGEX-4T-3/vasostatin-B、pGEX-4T-3/vasostatin-C以及pGEX-4T-3/vasostatin-A-C,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导GST融合蛋白表达。SDS-PAGE分析表明,表达产物主要以包涵体形式存在,改变诱导条件可增加可溶性表达量,包涵体形式的表达量约占菌全蛋白总量的55%。通过GST亲和凝胶纯化目的蛋白并用凝血酶(Thrombm)酶切后获得单体vasostatin片段,采用MTT法检测其抑制内皮细胞增殖的活性,结果表明各GST-vasostatin及vasostatin片段具有程度不同的抑制bFGF诱导的内皮细胞增殖活性,其中以片段vasostatin-B(含氨基酸135-164)的抑制活性最为显著。可知人vasostatin片段中的氨基酸135-164区域是活性较强的区域,为进一步对其生物活性及作用机理的研究奠定了基础。此研究可能为肿瘤及其它血管生成相关疾病的治疗提供新的策略。
vasostatin片段;克隆表达;血管生成抑制;肿瘤
暨南大学
硕士
遗传学
王莹
2005
中文
R346
2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）