中药植物金果榄抗菌活性及活性物质研究
本文以采自广西北部及广西东南地区的63个科的共104种植物为筛选对象,植物材料用甲醇冷浸提取后,测定植物提取物对柑橘炭疽病菌的抗菌活性。在活性筛选基础上,选择对供试菌具有较高抑制活性的金果榄Tinospora capoillpes Gag-nep,采用活性追踪法对其抗菌活性成分进行分离,并鉴定出活性成分的结构,初步研究了金果榄的抗菌机理。以柑橘炭疽病菌Colletotrichum gloeosporidides(Penz.) Sacc为供试菌,采用菌丝生长速率法测定了104种植物共116种植物提取物的抑菌活性。结果表明,在10mg/mL的质量浓度下,金果榄块根、广西地不容块根和枝叶、金线吊乌龟块根、石菖蒲花、黄连根茎6种提取物对柑橘炭疽病菌的抑制率达100.00%；弯蕊开口箭块茎、紫茎泽兰叶、云木香根茎3种植物提取物对柑橘炭疽病菌的抑制率在80.00%以上,分别为88.33%,87.98%,81.24%；其它大部分植物提取物对供试菌表现出一定的抗菌活性。进一步测定了扁骨风藤、紫茎泽兰叶、弯蕊开口箭块茎、金果榄块根、广西地不容块根、金线吊乌龟块根和黄连根茎对柑橘炭疽病菌的毒力。7种提取物对柑橘炭疽病菌的有效中浓度(EC50值)分别为0.7101mg/mL、2.2073mg/mL、0.8391mg/mL、0.1528mg/mL、0.8872mg/mL、3.0666mg/mL、0.1654mg/mL。其中,金果榄块根甲醇提取物对柑橘炭疽病菌的毒力最高,金线吊乌龟块根甲醇提取物对柑橘炭疽病菌的毒力最低,其最高与最低的相对毒力比值约为20倍。按照生物碱的分离程序将金果榄块根提取物分成非生物碱、弱碱性生物碱、中强碱性生物碱、正丁醇层生物碱和水层5部分,经活性测定,表明其抗菌活性成分主要存在于弱碱性生物碱层、中强碱性生物碱层。通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析和薄层层析,并以柑橘炭疽病菌为供试菌进行活性追踪,从金果榄提取物中分离获得2个活性化合物,经核磁共振(NMR)和质谱(MS)解析,分别被鉴定为巴马亭和药根碱。采用菌丝生长速率法测定了巴马亭对柑橘炭疽病菌的毒力,同时测定了巴马亭对另外10种植物病原真菌的抑菌活性并进一步测定其对其中6种植物病原真菌的毒力,结果表明,巴马亭对柑橘炭疽病菌的EC50为0.0348mg/mL、对玉米炭疽病菌和梨锈病菌的毒力分别为0.1302mg/mL、0.1356mg/mL；抗菌活性高于对其他供试菌种的抗菌活性。测定了巴马亭对12种动物致病细菌的最低抑制浓度(MIC),结果表明巴马亭对枯草芽孢杆菌的抑制活性最强,其最小抑制浓度为0.1mg/mL,对金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌和伤寒沙门氏杆菌的最小抑制浓度均为0.2mg/mL,对其余5种供试细菌的最小抑制浓度在0.3mg/mL~0.8mg/mL之间。对藤黄微球菌、铜绿假单胞菌和痢疾志贺氏菌的最小抑制浓度>；1mg/mL。测定了药根碱对柑橘炭疽病菌的毒力,同时测定了药根碱对另外10种植物病原真菌的抑菌活性并进一步测定其对其中7种植物病源真菌的毒力。结果表明,药根碱对柑橘炭疽病菌的EC50为0.0240mg/mL、对玉米炭疽病菌和梨锈病菌的毒力分别为0.1158mg/mL、0.1097mg/mL；抗菌活性高于对其他供试菌种的抗菌活性。测定了药根碱对12种动物致病细菌的最低抑制浓度(MIC),结果表明药根碱对枯草芽孢杆菌的抑制活性最强,其最小抑制浓度为0.1mg/mL,对蜡状芽孢杆菌、溶壁微球菌、普通变形杆菌和伤寒沙门氏杆菌的最小抑制浓度均为0.2mg/mL,对其余4种供试细菌的最小抑制浓度在0.3mg/mL~0.6mg/mL之间。对藤黄微球菌、铜绿假单胞菌和痢疾志贺氏菌的最小抑制浓度>；1mg/mL。金果榄提取物以及活性化合物巴马亭和药根碱对植物病原真菌菌丝体形态有影响,使部分菌丝体膨大、畸形、扭曲、断裂,内容物外泄后菌丝体成空壳。巴马亭和药根碱对4种供试菌的细胞膜具有不同程度的破坏作用,金果榄粗提物对4种供试菌的蛋白质合成具有不同程度的抑制作用。
金果榄;柑橘炭疽病菌;抗菌活性;巴马亭;药根碱
广西师范大学
硕士
野生动植物保护与利用
邓业成
2010
中文
S482.292
2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）