脂联素对皖南花猪垂体生殖内分泌的影响
皖南花猪是我国的良种猪之一,它有成熟早和繁殖力高等典型特点。脂联素(Adiponectin,Adp)是一种脂肪组织有关的激素,具有多种生物学作用,与生殖也有十分密切的关系。本试验通过分析皖南花猪血清中黄体生成素(LH)与卵泡刺激素(FSH)含量的发育性变化及垂体组织中脂联素受体(Adiponectin receptor,AdpR1、AdpR2)与组织中生殖相关基因mRNA表达量的发育性变化规律及性别间差异,探讨Adp与皖南花猪生殖方面的联系。通过重组脂联素(recombinant adiponectin,rAdp)对母猪垂体细胞的影响,探索Adp对生殖激素分泌的影响及机制。 1.皖南花猪血清促性腺激素的生长发育性变化及垂体中脂联素受体与生殖相关基因的发育性变化及性别差异 本试验动物选自安徽省黟县皖南花猪繁育中心,采用荧光实时定量PCR的方法检测0d,30d,45d,90d,180d的皖南花猪(各日龄样本数10头,公母各5头)垂体中脂联素受体(AdpR1、AdpR2)、促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、卵泡刺激素(FSH-β)、黄体生成素(LH-β)mRNA的表达水平,用ELISA方法检测血液中FSH与LH的浓度变化。 (1)血液中LH和FSH总体上有极显著的发育性变化(P<0.01),且变化趋势一致,均表现为先上升后下降再上升再下降的模式,在30d与90d有两个峰值。公、母猪LH和FSH的发育性变化同总体的发育性变化趋势一致,LH在性别间并无显著差异,而母猪FSH含量在30d、45d与180d显著高于公猪(P<0.05)。 (2)AdpR1与AdpR2在垂体中表达量的发育性变化趋势一致,总体表现为先降低再升高再降低的趋势,AdpR2 mRNA在垂体中显著的发育性变化(P<0.05),在0d与45d有两个峰值。此外,AdpR1mRNA在各日龄的表达量均显著高于AdpR2 mRNA的表达量。AdpR1 mRNA在公猪垂体中0d、30d和180d的表达量显著高于母猪(P<0.05)。 (3)GnRHR、LH-β和FSH-βmRNA在垂体中表达量的发育性变化趋势一致,均呈先上升后下降再上升再下降的模式,在30d与90d有两个峰值;LH-βmRNA有显著的发育性变化(P<0.05),GnRHR与LH-βmRNA在90d的表达量均达到最大,显著或极显著高于0d(P<0.05或P<0.05)。 (4)相关性分析结果: 皖南花猪在发育过程中,垂体AdpR1mRNA与AdpR2极显著相关(r=0.752,P<0.01);AdpR2与GnRHR显著负相关(r=-0.413,P<0.05);GnRHR与FSH-β、LH-β分别显著或极显著相关(r=0.530,P<0.05;r=0.538,P<0.01)。 公猪中AdpR1mRNA与AdpR2mRNA极显著相关(r=0.852,P<0.01),GnRHR与LH-β、FSH-β分别显著与极显著相关(r=0.500,P<0.05;r=0.828,P<0.01)。 母猪中AdpR1与AdpR2mRNA显著相关(r=0.541,P<0.05);GnRHR与LH-βmRNA显著相关(r=0.517,P<0.05)。母猪AdpR2与LH-β、GnRHR、血清FSH分别显著与极显著负相关(r=-0.507,P<0.05;r=-0.639,P<0.01;r=-0.460,P<0.05)。 此外,血液中FSH和LH含量显著相关(r=0.475,P<0.05),在公猪、母猪也分别显著与极显著相关(r=0.569,P<0.01;r=0.396,P<0.05);血液中FSH、LH含量与垂体组织中FSH-β、LH-βmRNA表达量分别显著相关为(r=0.403,P<0.05;r=0.376,P<0.05)。 以上结果表明:脂联素可能经AdpR1与AdpR2介导,通过GnRHR,或直接对垂体LH和FSH的分泌起抑制调节作用。 2.重组脂联素对皖南花母猪垂体细胞性激素分泌的影响和机制 选取90d皖南花母猪四头(安徽黟县皖南花猪繁育中心),无菌条件下取垂体组织做为实验材料。原代培养48h后用rAdp对细胞进行处理,用ELISA法测定垂体细胞培养液中LH和FSH的水平;荧光定量实时PCR法检测垂体细胞中AdpR1、AdpR2、LH-β、FSH-β、GnRHR mRNA、AMPK mRNA的表达量。 结果显示: (1)细胞培养液中LH与FSH含量的变化 2μg/ml与10μg/mlrAdp处理4h后的垂体细胞培养液上清中LH与FSH的含量极显著降低(P<0.01),2μg/ml处理组与10μg/ml处理组之间无显著差异;2μg/ml与10μg/mlrAdp处理24h后LH与FSH的含量变化差异并不显著。 (2)细胞中脂联素受体和生殖相关因子基因表达量的变化: rAdp处理腺垂体细胞4h后能显著增加细胞中AdpR1 mRNA的表达量(P<0.05),AdpR2 mRNA的表达量也有一定上升趋势,但不显著;rAdp能降低LH-βmRNA的表达(P<0.01),显著降低GnRHR mRNA的表达(P<0.05),rAdp使FSH-β与AMPK mRNA有下降趋势,10μg/mlrAdp显著抑制AMPK的表达(P<0.05)。rAdp处理24h后,腺垂体细胞中各基因表达并无显著差异。 结合体内外试验的结果,Adp可能主要经AdpR1的介导,作用于垂体,激活AMPK信号通道,通过抑制GnRHR mRNA的表达,从而抑制LH与FSH的合成与分泌。
皖南花猪;脂联素;性别差异;发育性变化;垂体组织;生殖内分泌
安徽农业大学
硕士
基础兽医学
周杰
2013
中文
S828.1;S852.2
49
2014-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）