植物(芹菜)叶片吡哆醛还原酶来源分析
维生素B6(VB6)是一种水溶性维生素,游离型为吡哆醇(Pyridoxine,PN)、吡哆醛(Pyridoxal,PL)和吡哆胺(Pyridoxamine,PM),相应磷酸酯形式为磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5’-phosphate,PNP)、磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate,PLP)和磷酸吡哆胺(Pyridoxamine-5’-phosphate,PMP)。其中PLP是VB6的主要辅酶形式,具有重要的生理功能,除参与多种氨基酸的代谢反应外,还涉及多种物质的合成和代谢反应。在生物体中,存在两种PLP合成途径,一种是从头合成途径(denovoPathway),另一种是补救合成途径(SalvagePathway),植物和微生物可以从头合成PLP,而动物则需要从外界摄取VB6通过补救途径合成机体所需PLP。其中,吡哆醛还原酶(PyridoxalReductase,PLR)是一种重要的酶,催化还原PL生成PN,维持PL在生物体内的动态平衡,具有重要生理作用。 在对植物中VB6代谢酶的研究过程中发现,芹菜叶片需经过一段时间的水浴(37℃,6h)以后,才能检测出PLR的催化活性。本课题以芹菜叶际为研究对象,研究吡哆醛还原酶的来源和基本性质。 实验采用采用苯肼衍生方法,在410nm处,检测PL和苯肼生成的有色络合物含量,测定芹菜叶片中吡哆醛还原酶(PyridoxalReductase,PLR)活性,并确定PLR的主要来源,结果显示芹菜叶际的PLR活性主要来源于芹菜叶片表面附着微生物。 在无菌操作环境中,对芹菜叶际表面微生物进行分离、计数,确定储藏过程中芹菜叶片表面微生物的变化情况,结果表明:PLR主要来源于真菌,在相同菌浓度下,PLR活性的强弱依次为真菌>细菌>放线菌。 结果显示:该酶的最适催化温度为37℃,最适催化pH为7.5。在35℃~45℃条件下,该酶显示出较高的活性,高于45℃时,随着温度的升高酶活损失加快;在pH7~8.5范围内酶活力较大,在pH6.5时酶活性降低为最高酶活性的44.68％。以NADPH为供氢体时,PLR有显著的催化活性;而以NADH为氢供体时,PLR没有显示催化活性。
芹菜;叶际微生物;吡哆醛还原酶;酶性质;催化活性
安徽农业大学
硕士
食品科学
黄龙全
2013
中文
S636.3;S601
41
2014-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）