噬菌体内溶素基因分离、鉴定及功能研究
随着致病性细菌耐药性的加剧,寻找有效且不易造成菌株耐药性的抗菌制剂迫在眉睫。噬菌体以及噬菌体编码的内溶素,是治疗和预防细菌感染最为理想的抗生素替代物,且它们对抗耐药性细菌具有较强的杀菌性。所以,从噬菌体中筛选具有抗菌活性的蛋白或多肽是一种新的途径和方法。本研究首先从鸡粪中分离到一株烈性噬菌体,编码该噬菌体衣壳蛋白的23基因序列与大肠杆菌噬菌体RB69的23基因序列(NCBI登录号:AY303349.1)的相似度达96％,命名为大肠杆菌噬菌体WL08;并从该病毒中克隆编码内溶素的E基因,序列分析结果表明,E基因全长474bp,编码157个氨基酸,与大肠杆菌噬菌体RB69的E基因相似性达98%;随后对E基因进行改造,用三个(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)单元构成的桥,将RI基因和E基因桥连,获得RIE基因,PCR的方法将E基因分三段扩增:E1-87、E34-157和E110-157。将RIE、E、E1-87、E34-157和E110-157基因克隆到pHERD30T载体上,通过生长曲线的测定,初步确定E蛋白和改造后的RIE蛋白、E1-87蛋白、E34-157蛋白和E110-157蛋白对大肠杆菌的抑制作用;PCR扩增E基因,克隆到pTYB11载体,并转化到大肠杆菌ER2566感受态细胞中,诱导表达E蛋白。初步测定了E蛋白纯品的体外抑菌活性,实验结果显示,在E蛋白终浓度达到1mg/ml时,E蛋白对大肠杆菌Top10和金黄色葡萄球菌两株菌都有一定的抑制作用。
噬菌体内溶素;基因分离;抑菌活性;菌株耐药性
内蒙古工业大学
硕士
生物化工
刘丽华
2010
中文
Q939.48;TQ033
91
2014-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）