大蒜素对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用及相关机制的初步探讨
目的: 本课题在人胃癌SGC-7901细胞上,研究大蒜素(diallyl trisulfide,allicin)对体外生长的人胃癌细胞生长、迁移及侵袭的作用并对其相关机制做初步探讨,为研究大蒜素的抗肿瘤作用靶点和临床上应用提供理论依据和实验依据。 方法: 采用细胞培养技术对人胃癌SGC-7901细胞进行培养,取对数生长期的细胞进行实验。 1.分别用12、24和48μg/ml三个浓度的大蒜素溶液对对数生长期的SGC-7901细胞干预12、24和48小时后,采用MTT法检测人胃癌SGC-7901细胞增殖情况,同时用流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染法检测人胃癌SGC-7901细胞的凋亡情况。 2.采用肿瘤细胞划痕愈合法检测不同浓度大蒜素对人胃癌SGC-7901细胞作用12、24和48小时后细胞迁移的变化;采用Transwell小室法检测不同浓度大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901作用24小时后细胞侵袭的变化。 3.观察不同浓度的大蒜素对SGC-7901细胞作用48小时后,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大蒜素对人胃癌SGC-7901细胞MMP-2、HMGB-1蛋白释放的影响;同时采用Westernblot法检测大蒜素对人胃癌SGC-7901细胞MMP-2、HMGB-1蛋白表达的变化。 结果: 1.镜下观察结果表明24和48μg/ml大蒜素作用48h后,与正常对照组相比,SGC-7901细胞体积变小,细胞呈圆形,并伴有大量的细胞碎片出现,漂浮细胞数量明显增加,且48μg/ml组比24μg/ml组变化更为明显,12μg/ml组变化不太明显。 2.MTT结果显示,与阴性对照组比较,12、24和48μg/ml大蒜素对培养12、24和48h时的SGC-7901细胞增殖具有明显的抑制作用﹙P<0.05﹚,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用也相应地增强。 3.AnnexinV-FITC/PI双染法结果显示,大蒜素可明显诱导SGC-7901细胞的凋亡,12、24和48μg/ml大蒜素组的SGC-7901细胞凋亡率从对照组的3.95±1.45％分别上升至6.28±0.59%、11.15±0.20%﹙P<0.05﹚和30.67±2.73%﹙P<0.01﹚,并呈一定浓度依赖性。 4.划痕愈合结果显示,大蒜素可明显抑制SGC-7901细胞的迁移,与对照组相比,12和24μg/ml大蒜素可显著抑制划痕12、24和48h时伤痕宽度的变窄﹙P<0.01﹚,并呈一定的时效关系,48h时抑制最为明显。 5.Transwell小室法结果显示,在12和24μg/ml大蒜素作用细胞24h,穿过Transwell小室下室面的细胞数从对照组的96.80±5.07个分别降至66.60±2.41和31.20±2.17个,提示大蒜素可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭(P<0.05),且呈浓度依赖关系。 6.ELISA结果显示,12、24和48μg/ml大蒜素作用48h时,人胃癌SGC-7901细胞MMP-2蛋白释放量从对照组的32.01±2.52ng/ml分别降至24.69±0.93、17.46±1.63和5.49±1.00ng/ml;HMGB-1蛋白释放量从对照组的1.32±0.14ng/ml分别降至0.89±0.05、0.65±0.03和0.15±0.13ng/ml,结果表明大蒜素可以下调SGC-7901细胞MMP-2、HMGB-1蛋白的释放量(P<0.05),且呈浓度依赖的关系。 7.Westernblot结果显示,12、24和48μg/ml大蒜素对人胃癌SGC-7901细胞的MMP-2、HMGB-1蛋白表达均有明显抑制作用(P<0.05),且呈浓度依赖的关系。 结论: 大蒜素可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移及侵袭,并诱导细胞凋亡,其抑制侵袭作用可能与抑制MMP-2有关,其对细胞凋亡诱导作用及抑制细胞迁移可能与抑制HMGB-1蛋白有关。
大蒜素;胃癌;SGC-7901细胞;细胞增殖;抗肿瘤作用
安徽医科大学
硕士
药理学
陈志武
2013
中文
R735.2;R151.3
57
2014-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）